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培養基的檢驗與驗收(六)選擇性增菌培養基


在分離特定的目標菌時,若樣品中存在較多的幹擾菌,直接分離會比較困難,而選擇性增菌培養基的主要作用是盡可能抑製雜菌的生長,讓目標菌得到較多的增殖,逐漸稱為優勢群體,則可以很好的提高檢出率。本次就來講一下選擇性增菌培養基的檢驗與驗收方法。
培養基的出廠檢驗
本次以7.5%氯化鈉肉湯為例進行講解
1.混合菌的接種:在試管中接種10-100CFU的金黃色葡萄球菌和1000-5000CFU的大腸埃希氏菌,可將金黃色葡萄球菌製成約10-100CFU/mL的菌懸液,大腸埃希氏菌製成約10000-50000CFU/mL的菌懸液,吸取0.9mL金黃色葡萄球菌菌液及0.1mL大腸埃希氏菌菌液至7.5%氯化鈉肉湯中,金黃色葡萄球菌菌液可直接使用TSA傾注計數接種量,大腸埃希氏菌菌液需進行百倍稀釋後,吸取1mL菌液用TSA傾注計數接種量。將接種後的培養基置36±1℃培養18-24h。
2.非目標菌的接種:吸取1mL 1000-5000CFU/mL非目標菌菌懸液加入至待測培養基試管中,接種2支平行,置於標準中規定的條件下進行培養。
3.混合菌培養液的接種:用10μL接種環挑取1環培養後的7.5%氯化鈉肉湯混合菌測試管的培養液,劃線到Baird-parker瓊脂平板上,每支試管劃1個平板,36±1℃培養24-48h。
4.非目標菌培養液的接種:吸取10μL經培養後的非目標菌培養液,塗布或傾注法接種到非選擇性平板(如TSA)上。同時每管接種一個平板,並按標準規定的培養條件培養平板。
5.結果判定:混合菌接種選擇性平板上的典型特征菌落數應>10CFU,非目標菌在非選擇性平板上菌落數應<100CFU。
培養基的驗收方法
將質控菌株接種至非選擇性肉湯培養基中過夜培養,稀釋至10-3,也可采用其他方法製備含菌量105-107CFU/mL的菌懸液,使用1μL接種環挑取1環菌液,接種至待測培養基中,置於標準規定的條件進行培養。
結果判定:接種目標菌的試管濁度值應達到2,接種非目標菌的試管濁度應為0或1。

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