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初步鑒定
氧化酶試驗：取約50 μL蒸餾水將氧化酶試紙浸濕，挑選純培養的單個菌落進行氧化酶試驗，用細玻璃棒或一次性接種環（針）挑取單個菌落，塗在試紙上。在30s內變為藍色或藍紫色為陽性，不變色為陰性。副溶血性弧菌為氧化酶陽性。
塗片鏡檢：將可疑菌落塗片，進行革蘭氏染色，鏡檢觀察形態。副溶血性弧菌為革蘭氏陰性，呈 棒狀、弧狀、卵圓狀等多形態，無芽胞，有鞭毛。
挑取純培養的單個可疑菌落，轉種3%氯化鈉三糖鐵瓊脂斜麵並穿刺底層，36 ℃±1 ℃培養 24 h，觀察結果。副溶血性弧菌在3%氯化鈉三糖鐵瓊脂中的反應為底層變黃不變黑，無氣泡，斜麵顏色不變或紅色加深，有動力（動力補充試驗：使用3%氯化鈉V-P半固體進行動力試驗，使用接種針挑取菌苔穿刺接種於3%氯化鈉V-P半固體培養基中，結果為沿穿刺線生長且擴散生長，表明有鞭毛有動力）
嗜鹽性試驗：挑取純培養的單個可疑菌落，分別接種 0%、6%、8%和 10%不同氯化鈉濃度的胰腖水，36 ℃±1 ℃培養 24 h，觀察液體混濁情況。副溶血性弧菌在無氯化鈉和 10%氯化鈉的胰腖水中不生長或微弱生長，在6%氯化鈉和 8%氯化鈉的胰腖水中生長旺盛
確定鑒定
取純培養物製備成菌懸液，分別接種100 μL菌懸液至含3%氯化鈉的甘露醇試驗培養基（陽性為黃色，陰性為藍色或藍綠色）、賴氨酸脫羧酶試驗培養基（注意：同時做氨基酸脫羧酶對照試驗，均加滅菌石蠟覆蓋培養基液麵；本管變紫色或紫紅色，對照管變黃色，為陽性；本管與對照管均變黃色為陰性。）、MR-VP培養基［培養結束需滴加VP試劑（甲液6滴，乙液2滴），混勻後繼續放置，4h之內變紅則為陽性，棕黃色或不變色為陰性］。以上所有生化試驗均在36 ℃±1 ℃培養箱中培養 24 h～48 h 後觀察結果；
取3%氯化鈉三糖鐵瓊脂隔夜培養物製備成菌懸液，接種100 μL菌懸液至含3%氯化鈉ONPG生化管中進行 ONPG 試驗（陽性為淡黃或黃色，陰性無顏色）。
結果與報告
根據檢出的可疑菌落生化性狀，報告 25 g（mL）樣品中檢出副溶血性弧菌。如果進行定量檢測，根據證實為副溶血性弧菌陽性的試管管數，查最可能（MPN）檢索表，報告每 g（mL）副溶血性弧菌的MPN值。副溶血性弧菌菌落生化性狀和與其他弧菌的鑒別情況分別見表2和表3。