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腸杆菌科檢驗(一)樣品處理和分離操作


按照《GB 4789.41 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 腸杆菌科檢驗》標準,食品中腸杆菌科細菌的檢驗有兩種方法。當樣品中目標菌含量較高時,采用平板計數法,目標菌含量較低時,則采用MPN法進行檢驗計數。
1、樣品處理
兩種檢驗方法的樣品處理和稀釋,完全相同。都是取25g(mL)樣品,加入225mL的BPW中,進行均質。然後取均質液進行10倍係列稀釋。
2、分離
(1)平板計數法,是選擇2-3個適宜連續稀釋度的樣品勻液,各取1mL分別加入無菌培養皿內,用VRBGA進行傾注後,36℃±1℃ 培養18 h~24 h,挑典型菌落劃線至NA平板,培養後進一步鑒定。
(2)MPN法,是選擇3個適宜連續稀釋度的樣品勻液,每個稀釋度加入3管BPW試管中,共9管 BPW,置於 於 36℃ ±1℃ 培養 18h±2h。
然後,從每支試管中,分別吸取1mL增菌液,加入10mLEE肉湯管,EE肉湯管編號與BPW一一對應。36℃±1℃ 培養 24 h±2 h。
從每支EE肉湯管中分別取1環培養物,劃線接種於VRBGA平板,36℃±1℃培養24 h±2 h,觀察平板上有無典型菌落。挑典型菌落劃線至NA平板,培養後進一步鑒定。
兩種方法分離出的典型菌落,均不能直接進行計數,尚需進一步鑒定確認後,才能按相關方法進行計數。有關腸杆菌科細菌鑒定方法、結果判定和計數方法等內容,待後續視頻講解。
注意事項:
(1)MPN法中,每個試管都要有唯一編號,且編號與平皿上的編號一致,避免混淆。
(2)有關計數:VRBGA上的可疑菌必須經過進一步鑒定確認後,才能進行計數。

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