天然細胞培養基(三)

血清質量的鑒定

1.理化性質：如滲透壓、pH值、蛋白電泳圖譜、蛋白含量、激素水平、內毒素等。蛋白含量包括血清總蛋白含量（不低於35-45g/L）、球蛋白含量（應小於20g/L)、血紅蛋白含量等。其中球蛋白含量是一項非常重要的指標，血清中球蛋白主要是抗體，球蛋白含量越低血清質量越高。血紅蛋白也是越低越好。

2.微生物檢測：包括細菌、真菌、支原體、病毒等。特別是對支原體、病毒的檢測，支原體是一種很小的微生物，可通過孔徑22u的濾膜。支原體、病毒汙染在光學顯微鏡下難於察覺，細胞也能生長繁殖，但會影響實驗結果。檢測支原體的方法很多，如培養法、PCR法、熒光染色法、電鏡觀察法等。

3.促生長效果：這是血清重要的特性之一，應當以培養的細胞來檢測。有兩種方法：克隆形成率、貼瓶率測定法和連續傳代培養法。

（1）克隆形成率測定:一般以懸浮生長的細胞為培養對象，按有限稀釋法做克隆化培養，將不同批號的血清配製成不同濃度的培養基，細胞也稀釋成不同濃度，接種到96孔板，每孔200ul，培養一定時間，統計有克隆生長的孔，計算出百分比，再與對照的標準血清相比較，就可看出不同批號血清間的區別。比較低的濃度，更能觀察出血清質量間的細微差別。

（2）貼瓶率測定:是以貼壁細胞為培養對象，將細胞稀釋至低密度，接種至平皿，每皿200或100個細胞，以不同濃度的血清培養基培養，培養一定時間後棄培養基，染色後統計集落數，計算出集落數占接種細胞數的百分比，同樣再與標準血清比較，判斷血清質量高低。

（3）連續傳代培養法:是將細胞培養於3個一定體積的培養瓶中，待測血清配製為5％濃度，一般於第七天收集細胞，計數，取平均值，中間可以更換一次培養基。連續測試三個周期以上，觀察細胞生長狀況，並將每次的計數結果與標準血清的測試結果比較。

4.對於使用者，判斷血清質量先從外觀入手。好的血清應該是透明清亮，土黃色或棕黃色，無沉澱或極少沉澱，比較粘稠。如發現血清渾濁、不透明、含許多沉澱物，說明血清汙染或血清中的蛋白質變性；若血清呈棕紅色，說明血清中的血紅蛋白含量太高，取材時有溶血現象；如果搖晃時感覺液體稀薄，說明血清中摻入的生理鹽水太多。如果要進一步了解血清的質量，則應連續培養某些細胞，觀察細胞生長狀況。

正確的使用及保存血清，才能使血清發揮應有的作用。

1.使用前處理：大部分血清在使用前必須滅活處理，即56℃30分鍾。滅活的目的是去除血清中的補體成分，避免補體對細胞產生毒性作用。血清經過滅活也會損失一些對細胞有利的成分，如生長因子，因此也有人提出血清不經滅活直接用於培養，這樣做的前提是確認血清中不含補體成分。對於一些品質高的胎牛血清和新牛血清可以考慮不經滅活直接用於細胞培養。

2.儲存條件：血清一般儲存於－20℃，同時應避免反複凍融。購買大包裝的血清後，首先要滅活處理，然後分裝成小包裝，儲存於－20℃，使用前融化。融化時最好現置於4℃。融化後的血清在4℃不宜長時間存放，應盡快使用。

3.使用濃度：自從有了合成培養基，血清就是作為一種添加成分與合成培養基混合使用，使用濃度一般為5－20％，最常用是10％。過多血清容易使培養中的細胞發生變化，特別是一些二倍體的無限細胞係，迅速生長之後容易發生惡性轉化。

采購血清時，最好先從供應商處索取樣品進行試驗，選定一批後就要保留足夠使用6個月至1年的量，直至用另一批經過預先試驗的樣品代替。