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天然細胞培養基(二)



錄入時間:2010-6-29 15:49:54 來源:丁香園

血清培養基主要問題
1.血清的成份可能有幾百種之多,目前對其準確的成份、含量及其作用機製仍不清楚,尤其是對其中一些多肽類生長因子、激素和脂類等尚未充分認識,這給研究工作帶來許多困難。
2.血清都是批量生產,各批量之間差異很大,而且血清保存期至多一年,因此,要保證每批血清的相似性極為困難,從而使實驗的標準化和連續性受到限製。
3.對大多數細胞,在體內狀態,血清不是它們接觸的生理學液體,隻是在損傷愈合以及血液凝固過程中才接觸血清,因此使用血清有可能改變某種細胞在體內的正常狀態,血清可能促進某些細胞的生長(成纖維細胞)同時抑製另一類細胞生長(表皮細胞)。
4.血清含一些對細胞產生毒性的物質,如多胺氧化酶,能與來自高度繁殖細胞的多胺反應(如精胺、亞精胺)形成有細胞毒性作用的聚精胺。補體、抗體、細菌毒素等都會影響細胞生長,甚至造成細胞死亡。     5.動物個體不同,血清產地、批號不同,每批質量差異甚大,其成分不能保持一致。
6.取材中可能帶入支原體、病毒,對細胞產生潛在影響,可能導致實驗失敗或實驗結果不可靠性。
7.大規模生產中,血清來源越來越困難,價格昂貴,是構成動物細胞培養對生產成本的主要部分之一。
 血清的質量標準
血清質量高低取決於兩方麵因素:一是取材對象,二是取材過程。用於取材的動物應健康無病並且在指定的出生天數之內,取材過程應嚴格按照操作規程執行,製備出的血清要經過嚴格的質量鑒定。WHO公布的《用動物細胞體外培養生產生物製品規程》中的要求:
1.牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國家。並應具備適當的監測係統。
2.有些國家還要求牛血清來自未用過反芻動物蛋白飼料的牛群。
3.證明所用牛血清中不含對所生產疫苗病毒的抑製物。
4.血清要通過濾膜過濾除菌,保證無菌。
5.無細菌、黴菌、支原體和病毒的汙染,有些國家要求無細菌噬菌體汙染。
6.對細胞有良好的支持繁殖作用。
我國在對牛血清的質量2000年版《中國生物製品主要原輔料質控標準》中提出比較嚴格的標準要求。包括蛋白質含量,細菌、真菌、支原體、牛病毒、大腸杆菌噬菌體、細菌內毒素,支持細胞增殖檢查。

 

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