一、培養基、抗生素、生長因子
|
抗生素 |
英文名稱及縮寫 |
抗性基因 |
貯藏液濃度(mg/ml) |
使用終濃度（μg/ml） |
|
鏈黴菌 |
大腸杆菌 |
|
MM |
2CM |
YEME |
LA或LB |
|
氨苄青黴素
氯黴素
潮黴素
卡那黴素
壯觀黴素
鏈黴素
硫鏈絲菌素
紅黴素
阿泊拉黴素 |
Ampicillin, Amp Chloramphenicol, Cml
Hygromycin, Hyg
Kanamycin, Km
Spectinomycin, Spc
Streptomycin, Str
Thiostrepton, Thio
Erythomycin, Ery
Apramycin, Am |
bla
cat
hyg
aac或aph
aadA
str
tsr
ermE
aac(3)IV |
100
25(無水乙醇配)
50
25
50
50
25(DMSO配)
100
50 |
R
10
10
2?
50
10
5
100
10 |
R
－
25
50
50
25
10
－
50 |
R
－
－
－
50
－
2.5
－
50 |
50-100
25
50
50
50
25
不敏感
20
30-50 |
*– 表示無記錄或不能使用，貯存液除特別說明外均用無菌水配製
*此表僅供參考！！！
*R表示不敏感
*Km 和Am有交叉抗性，所以同時具有這兩種抗性基因時應適當提高抗生素的量，並作好對照。
*Hyg易見光分解，應用錫箔紙包好。
*有些抗生素需要在低鹽的環境（如DNA培養基）下篩選效率較高，如Hyg, Km, Vio
LB（Luria-Bertani）培養基
胰蛋白腖 10g，
酵母抽提物 5g，
NaCl 5g，葡萄糖 1g，
蒸餾水加至 1000ml，
pH7.3左右（滅菌後第一次用時還要調一次）
LB中加入終濃度為1.5-2%的瓊脂粉(不同的瓊脂加的量不同，如青島瓊脂大概需1.5%，而華美的需要2%)。
＊做藍白斑篩選時不加葡萄糖
溶液：L-天冬酰胺 0.5g，
K2HPO4 0.5g,
MgSO4·7H2O 0.2g,
FeSO4·7H2O 0.01g,
蒸餾水至 1000ml
將每250ml溶液分裝到裝有2.5g瓊脂的500ml三角瓶中，滅菌，使用時每瓶加入50％葡萄糖（8磅滅菌）5ml，調pH7.0。
配置MM的瓊脂有lab agar、Ice agar(IA)
R5（1L）鏈黴菌原生質體轉化時用
蔗糖 103g
K2SO4 0.25g
MgCl2·6H2O 10.12g
葡萄糖 10g
Difco酪蛋白氨基酸 0.1g
微量元素溶液 2ml
Oxoid酵母提取物 5g
TES 5.73g
加蒸餾水至 1000ml
稱取5.5g Difco瓊脂放入500ml三角瓶中，倒入250ml上述溶液，然後塞上塞子後8磅滅菌（114度15分種）。使用時，將培養基融化，每瓶中加入：
KH2PO4(0.5%) 2.5ml
CaCl2·2H2O(5M) 1ml
L-脯氨酸(20%) 3.75ml
NaOH(1M)調pH至7.3
對營養缺陷型菌株加入適當的營養因子（請參考《手冊》）
YEME(酵母膏-麥芽膏培養基) 1L（液體培養鏈黴菌）
Oxoid酵母提取物 3g
Oxoid蛋白腖Tryptone 5g
麥芽提取物（BD公司原Difco公司218630） 3g
葡萄糖 10g
蔗糖 ＊ 340g
蒸餾水 至1000ml
高壓滅菌後加入：（8磅滅菌，113－114゜C，15min，自動滅菌鍋一次不能滅過多東西，否則會滅不徹底。）
MgCl2·6H2O(2.5M) 2ml/L
製備原生質體時，還要加入：
甘氨酸（20%） ＊ 25ml/L
＊ 蔗糖的主要作用是維持鏈黴菌生長時的滲透壓。
＊ 甘氨酸被認為能幹擾鏈黴菌細胞壁的形成，使菌絲體片段更短，利於溶菌，有利於外源DNA的導入。
TSBY （1L）（液體培養鏈黴菌）
Oxoid胰腖豆湯粉（TSB） 30g
蔗糖＊ 340g
Oxoid酵母抽提物 5g
蒸餾水 至1000ml
*不同菌株培養需要不同濃度的蔗糖，蔗糖的主要作用是維持鏈黴菌生長時的滲透壓。
將黃豆餅粉加蒸餾水煮2到3小時，用紗布過濾得到濾液，將每250ml濾液分裝到裝有5g瓊脂，5g 甘露醇的500ml三角瓶中，10磅滅菌，使用時調pH7.2-7.3。
2CMY培養基（用於井崗的接合轉移）
可溶性澱粉 10g
胰蛋白腖 2g
NaCl 1g
(NH4 )2SO4 2g
K2 HPO4 1g
CaCO3 2g
無機鹽溶液* 1 ml
瓊脂 20g
蒸鎦水 1000 ml
PH7.2
無機鹽溶液(每升)
FeSO4 .7H2 O 1g
MgCl.6 H2 O 1g
ZnSO4. 7H2 O 1g
YMS培養基（阿維，井崗產孢）
酵母抽提物 4g
可溶性澱粉 4g
麥芽糖 10g
CoCl. .6 H2 O 5mg
瓊脂 20g
蒸鎦水 1000 ml
PH7.2
酵母抽提物 4g
麥芽糖 10g
葡萄糖 4g
MgCl 2g
CaCl 1.5g
瓊脂 15g
蒸鎦水 1000 ml
PH7.2
天藍色鏈黴菌1258 、J1501等都是營養缺陷型菌株，培養這些菌株時一般需向培養基中補加營養因子，使用濃度如表
生長因子補充物的使用濃度表
|
化合物 |
儲存液（mg/ml）1 |
終作用濃度（μg/ml） |
|
組氨酸（Histidine） |
10 |
50 |
|
其它氨基酸2 |
7.5 |
37 |
|
腺嘌呤，鳥嘌呤，
胸腺嘧啶，尿嘧啶 |
1.5 |
7.5 |
|
維生素 |
0.1 |
0.5 |
1. 儲存液用無菌去離子水配置，8磅滅菌後4oC保存。
2. 對於半胱氨酸營養缺陷型菌株，補充光氨酸。
上一篇：鏈黴菌菌種保藏
下一篇：鏈黴菌實驗操作3
