1.如何選用培養基？
培養某一類型細胞沒有固定的培養條件。在MEM中培養的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長。總之，首選MEM做粘附細胞培養、RPMI- 1640做懸浮細胞培養，各種目的無血清培養的首選是AIM V培養基（SFM）
2.為什麽要熱滅活血清？
加熱可以滅活補體係統。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在進行免疫學研究、培養ES細胞、昆蟲細胞和平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。
3.L－穀氨酰胺在細胞培養中重要嗎？它在溶液中不穩定嗎？
L－穀氨酰胺在細胞培養時是重要的。脫掉氨基後，L－穀氨酰胺可作為培養細胞的能量來源、參與蛋白質的合成和核酸代謝。L－穀氨酰胺在溶液中經過一段時間後會降解，但是確切的降解率一直沒有最終確定。L－穀氨酰胺的降解導致氨的形成，而氨對於一些細胞具有毒性。
4.GlutaMAX-I是什麽？培養細胞如何利用GlutaMAX-I？這個二肽有多穩定？
GlutaMAX-I二肽是L－穀氨酰胺的衍生物，將其不穩定的α－氨基用L－丙氨酸來保護。一種肽酶逐漸裂解二肽，釋放L－穀氨酰胺供利用。
GlutaMAX-I二肽非常穩定，即使在121磅滅菌20分鍾，GlutaMAX-I二肽溶液有最小的降解，如果在相同條件下，L－穀氨酰胺幾乎完全降解。
5.為什麽培養基中可以省去加酚紅？
酚紅在培養基中被用來作為PH值的指示劑：中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時為紫色。研究表明，酚紅可以模擬固醇類激素的作用（特別是雌激素）。為避免固醇類反應，培養細胞，尤其是哺乳類細胞時，用不加酚紅的培養基。由於酚紅幹擾檢測，一些研究人員在做流式細胞檢測時，不使用加有酚紅的培養基。
6.如何用台盼蘭計數活細胞？
用無血清培養基把細胞懸液稀釋到200－2000個/毫升，在0.1毫升的細胞中加入0.1毫升的0.4％的台盼蘭溶液。輕輕混勻，數分鍾後，用血球計數板計數細胞。活細胞排斥台盼蘭，因而染成藍色的細胞是死細胞。
7.如何消除組織培養的汙染？
重要的培養汙染時，研究者可能試圖消除或控製汙染。首先，確定汙染物是細菌、真菌、支原體或酵母，把汙染細胞與其它細胞係隔離開，用實驗室消毒劑消毒培養器皿和超淨台，檢查HEPA過濾器。
高濃度的抗生素和抗黴菌素可能對一些細胞係有毒性，因而，做劑量反應實驗確定抗生素和抗黴菌素產生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如兩性黴素B和抗黴菌素如泰樂菌素時尤其重要。
下麵是推薦的確定毒性水平和消除培養汙染的實驗步驟:
1 在無抗生素的培養基中消化、計數和稀釋細胞，稀釋到常規細胞傳代的濃度。
2 分散細胞懸液到多孔培養板中，或幾個小培養瓶中。在一個濃度梯度範圍內，把選擇抗生素加入到每一個孔中。例如，兩性黴素B推薦下列濃度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0,8.0 mg/ml。
3 每天觀測細胞毒性指標，如脫落，出現空泡，匯合度下降和變圓。
4 確定抗生素毒性水平後，使用低於毒性濃度2－3倍濃度的抗生素的培養液培養細胞2－3代。
5 在無抗生素的培養基中培養細胞一代。
6 重複步驟4。
7 在無抗生素的培養基中培養4－6代，確定汙染是否以已被消除。
8.培養基中丙酮酸鈉的作用是什麽？
丙酮酸鈉可以作為細胞培養中的替代碳源。盡管細胞更傾向於以葡萄糖作為碳源，但是，如果沒有葡萄糖的話，細胞也可以代謝丙酮酸鈉。
9.為什麽儲存在冰箱中的胎牛血清會出現沉澱？
GIBICO的胎牛血清 沒有預老化，儲存在2－8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等）可能聚集而形成沉澱或可見的混濁。這應該不會影響血清的質量。推薦在－20℃儲存胎牛血清，避免反複凍融。
10.目錄上說，Hank’s 平衡鹽溶液（HBS）要在空氣中使用，不需要CO2培養箱。原因是什麽？Hank’s 平衡鹽溶液（HBS）和Earle’s平衡鹽溶液（EBS）有什麽本質的功能差別？
HBS和 EBS 的主要差別在於碳酸氫鈉的水平，碳酸氫鈉的含量在Eagles (2.2g/L)中比在Hanks (0.35g/L) 中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡，以維持溶液的PH值。Eagles液在空氣水平的CO2 中，溶液會變堿，Hanks液在CO2培養箱中會變酸。如果希望在 CO2培養箱中保存組織，需要用Eagles液。如果僅僅是清洗將要在細胞培養基中儲存的組織，用Hanks液就可以了。
11.Qualified和 Certified 胎牛血清有什麽差別?
Certified 胎牛血清包括了Qualified 胎牛血清執行的所有的標準檢驗程序，而且除了這些標準檢測，Certified胎牛血清還有如下一些附加的檢測：
End-Point Determination of Endotoxin Content
噬菌體檢驗
生物化學檢測
激素的檢測
血紅蛋白檢測
Sf9 細胞生長促進及方法學檢測
12.二價離子抑製胰蛋白酶活性嗎？使用胰蛋白酶時加入EDTA的目的是什麽？
二價離子的確抑製胰蛋白酶活性。EDTA用來螯合遊離的鎂離子和鈣離子，以便保持抑製胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細胞前，用EDTA清洗細胞，以消除來自培養基中所有的二價離子。
13.製備 lipid-DNA的方法會影響轉染效率嗎？
是的。對於LIPOFECTAMlNE Reagent，稀釋試劑在100μl OPTI-MEM中，稀釋DNA在100μl OPTI-MEM中。混合兩種溶液在室溫下孵育15分鍾。對於LIPOFECTIN Reagent，在加入DNA溶液前允許稀釋的試劑和培養基孵育至少30分鍾可以增加3倍的效率。確保複合物在沒有血清的情況下形成。孵育15分鍾後，在複合物中加入含有血清的培養基（800μl）。（注意以上是35mm培養皿使用體積）。對於LIPOFECTAMlNE Plus Reagent DNA應該在與脂質體混合之前首先與Plus Reagent混合。LIPOFECTAMlNE 2000的操作步驟允許在一個很小的體積下混合DNA和脂質體，接下來可以不需要換培養基的情況下直接加入。對於每一種脂質體的詳細的信息可以參考產品說明書。
14.我使用SF900 Ⅱ時，細胞生長良好，但是為什麽我的蛋白產物不如使用Graces 液和10%胎牛血清時效果好？
如果目的蛋白是一個後期蛋白，它將與蛋白酶一起表達，這些蛋白酶將會作用於目的蛋白。在加有血清的培養基中，這些蛋白酶將作用到血清中的蛋白，從而使目的蛋白產品保持完好。在無血清配方中，蛋白酶作用的唯一底物是你的目的蛋白。為了避免這一問題，加入一些蛋白酶抑製劑或加入少量的血清（少於1％），讓血清給蛋白酶提供作用底物。
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