15.如何檢測內毒素(熱源)水平？
LAL（Limulus Amebocyte Lysate）試驗是可用的最敏感和特異的檢測細菌內毒素的方法。Levin和Bang 發現細菌可引起鱟（Limulus polyphemus）血管內的凝集作用。內毒素啟動一個細胞內酶原係統（絲氨酸蛋白酶級聯反應係統），通過修飾凝集素，產生一種透明的膠，LAL中的凝固蛋白，從而，形成不可溶的基質。LAL試劑緩衝的鱟（血細胞）裂解物。
胎牛血清的內毒素檢測是在Grand Island，按照手冊上Gel-clot 方法進行的。在對血清產品進行內毒素檢測前，用無熱源的水1：10稀釋樣品。稀釋樣品沸水育5分鍾，以消除抑製劑。（通常，血液中的內毒素結合成份的出現會抑製凝膠過程，使內毒素不能與LAL反應。樣品預先熱處理可以消除這種抑製作用。）
16.我可以使用固體形式的Murashige Skog 培養基嗎？
如果使用固體形式的培養基，需要加入瓊脂。瓊脂加入前要先滅菌。應該避免MS培養基的直接滅菌，應該高壓滅菌瓊脂溶液，然後把融化的瓊脂溶液加入到MS培養基中。
17.20℃下配製的緩衝液，在較高或較低的溫度下PH值會改變嗎？
對於普通使用的緩衝液，PH值隨溫度變化而變化。
下表列出溫度改變10℃時，PH值的變化情況
例如 20℃下配製PH7.4 Tris緩衝液,40℃時PH值為 7.4-（2x0.310）＝6.78
緩衝係統 pKa/20℃ [Delta]pKa/10℃
Mes 6.15 -0.110
Ada 6.60 -0.110
Pipes 6.80 -0.085
Aces 6.90 -0.200
Bes 7.15 -0.160
Mops 7.20 -0.013
Tes 7.50 -0.200
Hepes 7.55 -0.140
Tricine 8.15 -0.210
Tris 8.30 -0.310
Bicine 8.35 -0.180
Glycylglycine 8.40 -0.280
18.室溫下(25℃)配製的Tris-HCl溶液，在37℃使用時PH值是多少？
緩衝液的PH值隨溫度變化而變化。下表列出了50mM Tris-HC 溶液在4℃，25℃，37℃時，不同的PH值。
4℃ 25℃ 37℃
8.1 7.5 7.2
8.2 7.6 7.3
8.3 7.7 7.4
8.4 7.8 7.5
8.5 7.9 7.6
8.6 8.0 7.7
8.7 8.1 7.8
8.8 8.2 7.9
8.9 8.3 8.0
9.0 8.4 8.1
9.1 8.5 8.2
9.2 8.6 8.3
9.3 8.7 8.4
9.4 8.8 8.5
19.昆蟲細胞培養的最適PH值和滲透壓是多少？
生長培養基的PH值對細胞的增值和病毒或重組蛋白的生產均會產生影響。對於大部分鱗翅類昆蟲細胞係，在PH值 6.0－6.4範圍的大部分應用效果良好。培養鱗翅類昆蟲細胞係時，培養基的最適滲透壓是 345－380mOsm/kg.。為保證可靠和持久的細胞培養方式，減少技術問題，保持PH值和滲透壓在以上所列的範圍之內。
20.High Five細胞有任何其它名稱嗎？
High Five細胞也被稱為Trichoplasia ni 5B1-4和BTI-TN-5B1-4。
21.PFHM-II 和HYBRIDOMA-SFM之間有什麽差別？
PFHM-II (Protein-free Hybridoma Medium)是不包含有蛋白質的單克隆抗體生產培養基。如果作為雜交瘤生產培養基使用，PFHM-II可能需要補充低水平的血清。HYBRIDOMA-SFM即是雜交瘤生產培養基，也是單克隆抗體生產培養基。它包含低水平的蛋白質。
22.在High Five無血清培養基中去汙劑的濃度是多少？
High Five無血清培養基中去汙劑的濃度：0.025 g/L Tween-80，1.0 g/L Pluronic Poly-all。
23.High Five細胞用多大的密度凍存？
3.0x10E6 cells/ml
24.在我的果蠅培養基中發現形成白色沉澱，加熱後溶解。它是什麽？對我的細胞有害嗎？
可能是穀氨酰胺沉澱，但是更可能是L-酪氨酸沉澱。培養基中穀氨酰胺的濃度比典型的2mM高6倍。酪氨酸的濃度比在RPMI 1640中高25倍，而且比穀氨酰胺更加難以溶解。沉澱也可能是不止一種成分的複合物。它可能是由於貯存在局部溫度較低的地方引起。隻要沉澱在培養條件下可以溶解，對實驗不會有不利的影響。
25.如何從T25瓶中轉移sf9細胞？能用胰蛋白酶消化嗎？
我們強力推薦使用脫落細胞的方法，因為這項技術破壞性最小，生活力最高。正如手冊上所顯示，通過使用巴氏德吸液管，讓細胞上培養基流動。作為一種選擇你也可以輕輕拍打培養瓶。隻有在絕對必要的情況下，才使用胰酶消化細胞。
胰酶消化一個T25瓶的sf9細胞：
1. 去除培養基。
2. 用2ml 1xPBS（足以覆蓋細胞表麵）洗滌細胞，去除PBS.
3. 加入2ml 1x胰酶EDTA（恰好覆蓋細胞表麵）。
4. 37 ℃孵育5到10分鍾。在儀器下檢測看到5分鍾後它們正在向上移動。
5. 向細胞中加入2ml 細胞培養液，移入錐形管，用2ml培養液洗瓶壁，移入同一錐形管中。（培養基中的FBS終止了胰酶的活性。）
6. 離心（1100rpm）沉澱細胞。去除培養基。
7. 用新的培養基重新懸浮細胞。傳代。
26.在Sf9, Sf21, 和high Five細胞懸浮培養時，肝素的使用量是多少？
為了防止懸浮培養細胞聚集的形成，使用肝素濃度為10單位/毫升細胞懸液。
27.如何評估ES細胞合格的胎牛血清？
使用D3 ES細胞。這是一個對於胎牛血清中生長促進、生長抑製和分化因子非常敏感的細胞係。
相關生長效率分析：
當ES細胞以非常低的密度傳入包含10％胎牛血清的生長培養基中，檢測開始和支持ES細胞克隆的能力。
細胞毒分析：
當以非常低的密度傳入包含30％胎牛血清的生長培養基中，檢測ES細胞和feeder細胞的生長能力。
相關形態學和分化分析：
檢測胎牛血清支持未分化ES細胞克隆的能力。通過堿性磷酸酶活性評估分化程度。未分化的ES細胞小顏色深紅粉紅，分化的細胞較大，豐滿，顏色較淺。
所有的分析在沒有ESGRO的情況下進行的，培養基中出現ESGRO會掩蓋由胎牛血清所導致的問題。（ESGRO或LIF經常用來保持ES細胞處於未分化狀態。）
經過培養發現，大約8批中有1批可以用來培養ES細胞。
28.在重新凍存sf9細胞前，它可以傳多少代？隨著傳代的次數的增加，它的感染能力會降低嗎？
通常情況當細胞經過30次傳代後，應該返回凍存。無論什麽時候記數時，都應該檢查細胞活力。如果超過95％的細胞保持有活力和在大約30小時左右加倍，細胞仍然可以使用。如果活力和加倍時間下降，它們的感染力將不在是有效的。
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