(一)目的
1.通過對大腸杆菌生長條件的探討及其生長曲線的測定，綜合訓練微生物實驗的基本實驗技能。
2.鞏固培養基的配製、滅菌、儀器的包紮、倒平板。
3.學習用比濁法測定細菌的生長曲線。
4.比較不同培養基的生長曲線
(二)原理
將少量細菌接種到一定體積的、適合的新鮮培養基中，在適宜的條件下進行培養，一定時間測定培養液中的菌量，以菌量的對數作縱坐標，生長時間作橫坐標，繪製的曲線叫生長曲線。它反映了單細胞微生物在一定環境條件下於液體培養時所表現出的群體生長規律。依據其生長速率的不同，一般可把生長曲線分為延緩期、對數生長期、穩定期和衰亡期。這4個時期的長短因菌種的遺傳性、接種量和培養條件的不同而有所不同。因此通過測定微生物的生長曲線，可了解個菌的生長規律，對於科研和生產都具有重要的指導意義。
測定微生物的數量有多種不同的方法，可根據要求和實驗室條件選用。本實驗用比濁法測定，由於細菌懸液的濃度與光密度（OD值）成正比，因此可利用分光光度計測定菌懸液的光密度來推知菌液的濃度，並將所測的OD值與其對應的培養時間作圖，即可繪出該菌在一定條件下的生長曲線，此法快捷、簡單。
(三)材料
1. 菌種：
大腸杆菌（Escherichia coli）
2. 營養瓊脂培養基：根據產品說明配製
3. 生理鹽水（0.9%NaCl）100mL，分裝入10支試管（每支9mL）
4．培養基：本實驗采取正交實驗確定大腸杆菌最優的生長條件，采取L934正交表，正交設計如下：
表頭（L934）：
實驗設計：
培養基經121℃滅菌20min。
5 儀器及其他用品
721型分光光度計、比色杯、恒溫搖床、培養箱、高壓滅菌器、電子天平、pH計、酒精燈、電爐、接種環、試管架、培養皿10個、無菌吸管（1mL）10支、燒杯、試管、錐形瓶12個（250mL）、膠頭、牛皮紙、矽膠塞等。
(四)流程
種子液 標記 接種 培養 測定
(五)步驟
1.標記編號
按要求配製培養基，將無菌培養基裝於10個250ml錐形瓶，分別編號為0h，4h，6h，8h，11h，14h，16h，18h，19h，21h。
2.接種培養
(1)種子液製備：
取大腸杆菌（Escherichia coli）斜麵菌種一支，用接種環刮取少量細菌於生理鹽水（或無菌水）中，用膠頭滴管震蕩均勻。
(2)搖床培養：
用1mL無菌吸管分別準確吸取1mL種子液加入已編號的9個三角瓶中，於37℃下在恒溫搖床上培養（180r.min-1）（以上步驟均需在無菌操作台上操作）。然後分別按對應時間將三角瓶取出，立即放冰箱中（2-4℃）貯存，待培養結束時一同測定OD值。
3.生長量的測定
將未接種的培養基倒入比色杯中，選用640nm分光光度計上調節零點，作為空白對照，並對不同時間培養液從0起依次進行測定，對濃度大的菌懸液用未接種的培養基適當稀釋後測定，使其OD值在0.1-0.65之間，經稀釋後測得的OD值要乘於稀釋倍數，才是培養液實際的OD值。
4.對第16h的培養液進行倒平板。
(六)生長曲線的比較
對所得數據進行生長曲線的繪製，比較各組培養基生長曲線上最大吸光度，
(七)思考題
1.剛買來的菌種一般是凍幹菌，應如何接種到斜麵？
2.在培養基調pH時應選用什麽試劑？
3.在接種培養時，對應時間取出三角瓶後，為什麽要立即放到冰箱中貯存？
4.正交試驗設計中，應如何進行數據處理分析？正交試驗是如何確定最佳生長條件？
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