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0.5%堿性複紅使用方法及現象

紀旭豔
錄入時間:2019-11-15 9:24:10 來源:青島betway必威西汉姆联生物

一、用途及原理

蘇雲金芽孢杆菌在形成芽孢的同時,會在芽孢旁邊生成一顆菱形、方形或不規則形狀的堿溶性蛋白晶體,稱為伴孢晶體。該晶體易被堿性染料著色,用堿性複紅染色後,可在顯微鏡下觀察到深紅色晶體。

此現象為蘇雲金芽孢杆菌的特征反應,在《GB4789.14-2014 蠟樣芽胞杆菌檢驗》中,該實驗為區分蠟樣芽胞杆菌和蘇雲金芽孢杆菌的唯一方法。

二、成分

堿性複紅···············0.5g

乙醇·················20mL

蒸餾水················80mL

三、操作方法

1、挑取純培養的單個可疑菌落接種於硫酸錳營養瓊脂平板上,30℃±1℃培養24 h±2 h, 並於室溫放置3 d~4 d;

2.挑取培養物少許於載玻片上,滴加蒸餾水混勻並塗成薄膜。經自然幹燥,微火固定;

3.加甲醇作用30 s後傾去,再通過火焰幹燥,於載玻片上滴滿0.5%堿性複紅,放火焰上加熱(微見蒸氣,勿使染液沸騰)持續1 min~2 min,移去火焰,再更換染色液再次加溫染色30 s,傾去染液用潔淨自來水徹底清洗、晾幹後鏡檢。

4.油鏡下觀察有無遊離芽胞(淺紅色)和染成深紅色的菱形蛋白結晶體。

四、試驗結果

①形態的深紅色菱形或方形晶體為伴孢晶體

②形態的橢圓形或卵圓形物的為菌體芽孢,一般很難著色

③形態的紅色杆狀物為蘇雲金芽孢杆菌菌體

注:如發現遊離芽胞形成的不豐富,應再將培養物置室溫2d~3d後進行檢查。 除蘇雲金芽胞杆菌外,其他芽胞杆菌不產生蛋白結晶體。

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注:本文屬betway必威西汉姆联生物原創,未經允許不得轉載。

 

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