組織和細胞的固定方法

 

固定方法有物理固定和化學固定兩類，物理固定可采用空氣幹燥（血塗片）、驟冷（在液氮中迅速冷凍）或微波固定等；化學固定有浸潤法（immersion method）和灌流法（perfusion method）。灌流法適用於動物實驗中對缺氧敏感的器官，如神經係統和胃腸等取材。

 

一、浸潤法

 

浸潤法是組織化學和免疫 組織化學常用的固定方法，一次要處理許多組織樣品時也多用此法。

 

預先需估計固定劑的用量，並在取材前配好固定液，分裝於小容器內，在容器上標記組別和取材時間。容器內放人記錄組織類型的紙條，以便包埋時辨認。固定液的用量應是樣品的40倍，以保證組織充分固定。固定時間可根據所選固定液和組織類型而定。

 

若進行酶組織化學染色，應在4℃短時間固定，固定時間長會導致酶活性減弱，甚至消失。

 

二、灌流固定法

 

此法是經血管途徑，將固定液灌注到欲固定的器官內，使生活的細胞在原位及時迅速固定，取下組織之後再浸入相同的固定液內繼續固定。

 

灌流固定時大動物多采用輸液方式，將固定液從一側頸總動脈或股動脈輸入，從另一側切開靜脈放血，輸入固定液與放血同時進行。固定液的輸人量因個體不同而異，即500―2000ml不等。

 

小動物多采用心髒主動脈灌流，如大鼠和小鼠，在吸人 深度麻醉情況下，打開胸腔，縱向切開心包膜，並用紗線在動脈弓下打一鬆結，然後用靜脈輸液針從左心室向主動脈方向刺人，針尖刺人後，隨即將紗線紮緊固定，勿使其移動，再將右心耳剪開放血。在灌注固定液前，先用含抗凝劑的37℃生理鹽水灌流，衝洗血管內的血液，防止血液凝固阻塞血管。抗凝劑常用肝素，劑量為40mg/L衝洗液。肝髒顏色由鮮紅變為淺白色時，即可灌流固定液，灌注速度為5～10ml/min，應在30分鍾內結束灌注並取材，而後將組織浸入相同的固定液中1～3小時。灌流固定對組織結構和酶活性保存較好。