離體葉培養包括葉原基、葉柄、葉鞘、葉片、子葉在內的葉組織的無菌培養。它大多經脫分化形成愈傷組織,再經再分化生出不定芽和不定根。
應用:不僅可用於研究形態建成、光合作用、葉綠素形成等理論問題,而且也是繁殖稀有名貴品種的有效手段。
葉培養特點:材料來源廣泛,數量大,容易培養,尤其對木本植物,生成的愈傷組織完整,數量多,較迅速等。
葉片再生能力: 以羊齒植物最多,雙子葉植物次之,單子葉植物最少。
再生方式:一種是直接誘導形成不定芽,另一種是先誘導形成愈傷組織,再經愈傷組織分化成植株,葉的離體培養技術如下:
1.材料選擇及滅菌 選擇健康潔淨的植株,取其較幼嫩葉片,衝洗幹淨,用70%酒精漂洗約10秒,再在飽和漂白粉液中浸3~15分鍾,或在0.1%升汞中浸3~5分鍾,以前者為佳。用無菌水衝洗數次,再放在無菌的幹濾紙上吸幹水分,以供接種用。對一些粗糙或帶茸毛的葉片要延長滅菌時間。注意要選擇成熟的葉片。
2.接種 將葉片切成約0.5cm見方小塊或圓片及薄片(如葉柄和子葉),注意選擇切塊位置。MS培養基附加BA 1~3,NAA0.25~1。
3.培養 培養條件為每天10~12小時光照,光強1500~3000Lx。
1)培養2-4周,葉切塊開始增厚腫大,進而形成愈傷組織。2)轉移到分化培養基上進行培養,其培養基的BA含量為2左右,約再過10天左右,愈傷組織開始轉綠出現綠色芽點,形成不定芽。通過繼代培養和生根培養,完成整個組培過程。
葉的培養比胚,莖尖和莖段培養難度大。首先要選用易培養成功的葉組織,如幼葉比成熟葉易培養,子葉比葉片易培養。其次要添加適當的生長素和細胞分裂素濃度,保證利於葉組織的脫分化和再分化。
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