草莓組織培養

　　　　草莓的形態特征和生物學特性 

草莓（Fragaria　spp．）為重要的漿果植物，栽培分布很廣，其總產量在漿果類中僅次於葡萄，居世界第二位。草莓果實柔軟多汁，含豐富的糖、酸、礦物質，維生素等。草莓可鮮食，也可加工成果醬，果酒等。其顏色鮮豔，是良好的配餐食品。 

草莓繁殖容易，結果早，收效快。尤其是近年的促成栽培，利用塑料大棚、日光溫室，使草莓的成熟期大大縮短，從每年的11月份到次年的6月份，都有新鮮草莓上市，填補了水果的淡季市場。 

（1）形態特征　草莓屬多年生草本植物，植株矮小，呈半平臥叢狀生長，根係為須根係，在土壤中分布較淺。草莓的莖呈短縮狀，分地上和地下部分，地上短縮莖節間極短，節密集，其上密集輪生葉片，葉腋部位著生腋芽。地下短縮莖為多年生，是貯存營養物質的器官，也可發育成不定根。匍匐莖是草莓的特殊地上莖，是其營養繁殖器官，莖細，節間長，一般座果後期發生。葉屬於基生三出複葉，呈螺旋狀排列，在當年生新莖上總葉柄部與新莖連接部分，有兩片托葉頂端膨大，圓錐形且肉質化。離生雄蕊20～35枚。雌蕊離生，呈螺旋狀排列在花托上，數目從60～600不等。花序為二歧聚傘花序至多歧聚傘花序。果實為假果，主要是花托膨大肉質化形成，瘦果以聚合果形式生於花托上。果實成熟時果肉紅色，粉紅色或白色。 

（2）生物學特性　草莓根係在土壤溫度達到2℃時開始活動，在10℃時開始形成新根，根係生長的最適溫度為15～20℃，秋季溫度降低到7～8℃時生長減弱。春季氣溫達5℃時植株開始萌芽，莖葉開始生長。草莓是喜光植物，但又比較耐蔭。光照充足，植物生長旺盛，葉片顏色深，花芽發育好，能獲得較高的產量。相反光照不良，植株生長勢弱，葉柄及花序柄細。葉片色淺，花朵小，果實小，著色不良。草莓的根係分布較淺，加上植株矮小，而葉片則較大，因此蒸發量大。在整個生長季節，葉片幾乎都在不斷地進行老葉死亡、新葉發生的過程，葉片更新頻繁。這些特點，決定了草莓對水分要求較高。但在不同的生長發育時期，對水分的要求不同。開花期土壤的含水量應不低於最大田間持水量的70%。果實膨大及成熟期土壤含水量應不低於80%，而秋季9、10月份，土壤持水量達60%即可，草莓不耐澇，要求土壤既有充足的水分供應，又要有良好的通氣條件。草莓對土壤適應性強，在各種土壤上都能生長。但由於是淺根性作物，要求肥沃、疏鬆、透水、通氣的中性、微酸性或微堿性土壤。 

栽培方法 

在自然條件下，草莓用匍匐莖分株法繁殖,這種方法繁殖係數高，保持了母本的優良性狀。在繁殖圃設1m寬行距，50～60cm株距定植，從5月到9月均可繁殖。圃內保證肥水供應，保持土壤濕潤、疏鬆，減少結果量。匍匐莖發生後，將其向母株四周拉開，排列均勻，並在偶數節上壓土促發根係，每條匍匐莖上可形成3～5個壯實的子幼苗，待莖苗長到3～4片葉時可以移出，作為定植苗用。移出時每株小苗靠母株一側的匍匐莖留2cm長剪斷，另一側齊根剪斷。起出的苗可進行假植，假植寬度以15×15cm為宜，假植深度以根和葉柄分界線埋入土壤1cm為宜，假植後要做好管理工作。

草莓的脫毒苗培養

（1）熱處理脫毒

將草莓植株在40～41℃溫度下處理4～6周，然後取微莖尖培養。

（2）微莖尖脫毒 

①初代培養　取草莓生長健壯的母株或匍匐莖上的頂芽，用自來水流水衝洗2～4h，然後剝去外層葉片，在無菌條件下，用0.5%次氯酸鈉溶液表麵消毒5min，並不停地攪動促進藥液的滲透。在無菌條件和解剖顯微鏡下剝取莖尖分生組織，以帶有1個葉原基的莖尖為好。0.2mm的莖尖無病毒率可達到100%，但接種後的成活率下降，並延長培養時間。莖尖分離後，迅速接入培養基MS+BA0.25+NAA0.25或White+IAA0.1中。培養條件為22～25℃，日照16～18h/d，光強3000Lx。經2～3個月的培養，可生長分化出芽叢，一般每簇芽叢含20～30個小芽為適。注意在低溫和短日照下，莖尖有可能進入休眠，所以較高的溫度和充足的光照時間必須保證。 

②繼代培養　把芽叢割成芽叢小塊，轉入MS培養基中，令其長大，以利分株，待苗長大到1～2cm時，可將芽叢小塊分成單株，再轉入前述的分化培養基中，又會重複上述過程，達到擴大繁殖的目的。 

③生根培養　在培養基中加入NAA 1mg/L或IBA 1mg/L，使發根整齊，由於草莓地下部分生長加快，發根力較強，也可將具有兩片以上正常葉的新莖從試管中取出進行試管外生根。 

④馴化　用鑷子把草莓苗從試管瓶中取出，洗掉根係附帶的瓊脂培養基。事先備好8×8cm或6×6cm的塑料營養缽，內裝等量的腐殖土和河砂。栽前壓實，澆透水，用竹簽在缽中央打一小孔，將試管苗插入其中，壓實苗基部周圍基質，栽後輕澆薄水，以利幼苗基部和基質密合。 

栽後的試管苗要培養在濕度較大的空間內，一般加設小拱棚保濕，並經常澆水，以增加棚內濕度，以見到塑料薄膜內表麵分布均勻的小水珠為宜。約過7～10d 後。當檢查有一定的根係生出，可逐漸降低濕度和土壤含水量，進入正常幼苗的生長發育管理階段。 

　花藥(Pollen)培養 

花藥培養操作簡單，因經愈傷組織途徑，再分化得到的即為無病毒苗，所以可免去病毒鑒定工作。 

（1）取材與培養

取花粉發育單核期的花蕾，置於潔淨培養皿中，內放一層濾紙，滴蒸餾水數滴保濕。將處理放入3～4℃冰箱中低溫保存3～4d。經預處理的花蕾先在70%酒精中浸泡半分鍾，取出放入新配製的飽和漂白粉上清液中消毒10min，用無菌水衝冼3次。然後在超淨工作台上剝取花藥，立即接種。花粉發育時期可采用醋酸洋紅壓片簽定，培養基為MS+2.4－D 0.4 +IAA2。去分化階段培養條件為24～26℃，10h/d,1500Lx，20d後可產生乳白色的愈傷組織。 

（2）植株分化 

將誘導出的花藥愈傷組織轉移至1/2 MS基本培養基中，添加GA 0.5，BA 0.5和三十烷醇4mg/L。愈傷組織經培養後很快轉綠，以後微帶淡紫紅色，15d後在表麵分化出半球形小突起，轉為綠色。20天後分化出幼葉、幼莖，並有不少突起物，以後陸續分化出新梢。   

草莓無病毒苗的鑒定Identification 

草莓花藥培養得到的為無病毒苗，而用生長點培養得到的植株，則必須經過病毒鑒定，確定其不帶病毒，才可以大量繁殖，用於生產。 

（1）草莓病毒的種類 

草莓病毒主要有四種，為斑駁病毒，皺葉病毒，脈結病毒和輕型黃邊病毒。斑駁病毒在EMC指示植物上表現不整齊的黃色小斑點；皺葉病毒在指示植物UC—1上產生不整齊的小斑點，以及不整齊的葉脈，葉柄暗褐色；脈結病毒在指示植物EMC上表現小葉向後反轉成風車狀，尖端卷曲，葉脈成帶狀褪綠；輕型黃邊病毒在EMC指示植物產生紅葉，數日即枯。 

（2）草莓病毒的鑒定方法 

因草莓的病毒在通過汁液接種時不感染，所以通常采用小葉嫁接法來進行鑒定。 

首先從被鑒定的草莓上采集長成不久的新葉，除去兩邊的小葉，中央的小葉帶1～1.5cm的葉柄，把它削成楔形作接穗。而指示植物則除去中間的小葉，在葉柄的中央用刀切入1～1.5cm，再插入接穗，用線把接合部位包紮好。為了防止幹燥，在接合部位塗上少量的凡士林。為保證成活，在二周內，可罩上塑料袋，置於半見光的場所。約經兩周時間，撤去塑料袋。若帶有病毒，嫁接後1～2個月，在新展開的葉、匍匐莖或老葉上會出現病症。

草莓無病毒苗的繁殖和利用(Propagation and Utilization) 

（1）防止蚜蟲的危害 

草莓無病毒苗的繁殖重要的是要防止無病毒苗的再度汙染。由於草莓病毒主要是蚜蟲傳播的，所以要搞好防蚜蟲工作。傳播草莓病毒的主要有草莓莖蚜、桃蚜和棉蚜。其中分布最廣泛的是草莓莖蚜，莖蚜的身體著生有釘狀的毛，可以寄生在寄主的全株各個部位上。一草一木防治時可使用馬拉鬆乳劑，氧化樂果乳劑等接觸殺蟲劑，防治期在5～6月和9～10月，特別是9～10月一次，可防止蚜蟲的越冬。     

為保證種苗的無病毒，在原種種苗生產階段，應在隔離網室中進行。傳播草莓病毒的蚜蟲較小，可以通過大於1mm網眼，故應采用0.4～0.5mm大小的規格，其中以300號防蟲網為好。 

（2）繁殖程序及提高繁殖率的措施 

草莓無毒苗的繁殖程序可分五步，包括病毒鑒定生產出無毒苗、原種種苗培養、原種種苗繁殖、良種種苗繁殖，生產用苗繁殖和栽培苗繁殖，前四步在隔離室中進行，後一步露地進行。為提高無病毒母株的繁殖株數可采用赤黴素處理和摘蕾的方法。赤黴素處理用5ppm的濃度，每株5ml，在5月上旬和6月上旬分兩次進行。摘蕾可減輕母株的營養負擔，促使匍匐莖的大量發生，田間地每一株可繁殖150～200株。 

（3）生產管理工作 

 母株必須保證每株有大於3.3m2的營養麵積。再是注意匍匐莖排列位置，不要交錯重疊，不利采苗，采苗也要適時進行。無論秋季或春季種植，繁殖床必須要進行土壤消毒，小麵積可用蒸氣劑料混合消毒，可防治草莓萎縮病、根腐病、萎凋病等的發生。 

隔離繁殖圃通常施緩效性肥料，每公畝用3t肥；為促使匍匐莖發生，要經常灌水。

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