生化試驗培養基——酶類測定培養基和試劑（上）

[用途] 檢查細菌使氨基酸脫梭基形成胺使培養基變堿的能力。常用的氨基酸有賴氨酸、鳥氨酸和精氨酸。

[配法]

蛋白腖5g ，牛肉浸膏5g，溴甲酚紫0.1g ，甲酚紅0.005g，吡多醛（VB₆ ）0.005g，葡萄糖0.5g，蒸餾水1L。

 加熱慢慢溶解，按10g / L 濃度加入所需要的氨基酸，調pH 至6.0 ，呈深亮紫色。分裝每支2ml，同時配對照管（不加氨基酸），高壓滅菌121 ℃ 15min ，冷卻後4 ℃ 冷藏備用。

[用法]

將試驗菌接種培養基，同時接種對照管1 支。並用滅菌的液體石蠟覆蓋，置35 ℃ 培養18-24h 。陽性菌初期由於細菌發酵葡萄糖產酸呈黃色，若繼續孵育，氨基酸經脫梭產生胺類使培養基變堿，指示劑改變顏色，呈紫色或紫紅色。陰性呈黃色或不變色

[質量控製]

賴氨酸脫羧酶：遲緩愛德華菌陽性，弗勞地枸椽酸菌陰性；鳥氨酸脫羧酶：產氣腸杆菌陽性，弗勞地枸椽酸菌陰性；精氨酸脫羧酶：鼠傷寒沙門菌陽性，普通變形杆菌陰性。

2 耐熱DNA 酶培養基

［用途］

用於檢測細菌所產生的耐熱脫氧核糖核酸酶。

[配法]

胰蛋白腖1.5g，植物蛋白腖0.5g，氯化鈉0.5g，DNA 2g / L ，瓊脂1.5g，蒸餾水100ml，2g/ L 甲苯胺藍溶液0.25ml。

將前6 種成分徐徐加熱溶解後，調pH 至7.4 ，加入甲苯胺藍溶液，分裝試管，121 ℃ 滅菌15min 後備用。

[用法]

上述瓊脂傾注於載玻片上，凝固後，打孔，孔徑2cm，孔內加入經100 ℃ 15min隔水加熱處理後的肉湯培養物。將載玻片孵育於35 ℃ 濕盒內4h ，取出觀察結果。陽性反應在孔周圍出現不小於4mm直徑粉紅色圈，陰性反應培養基的顏色無改變。

[質量控製]

金黃色葡萄球ATCC 25923 陽性；表皮葡萄球菌ATCC 12990 陰性。

3 DNA 酶試驗培養基

[用途]

供細菌DNA 酶測定用。

[ 配法]

DNA 2g，胰酪腖15g，大豆腖5g，氯化鈉5g，瓊脂20g ，蒸餾水1L。

將5 種成分混合於蒸餾水中，加熱溶解，校正pH 至7.2-7.4 ，分裝三角燒瓶，經115 ℃ 滅菌15min，傾注滅菌平皿，4 ℃ 冷藏備用。

[用法]

將待檢菌作點狀穿種在平板上，置35 ℃ 培養24h 。待細菌生長成集落菌苔後，在其菌苔上及周圍滴加0.1mol／L 鹽酸溶液數毫升，待片刻後，如待檢菌DNA 酶陽性，可在菌苔的周圍出現明顯的透明圈；而陰性者則無透明圈出現。

[質量控製]

金黃色葡萄球菌ATCC 25923 和粘質沙雷菌ATCC 274 陽性；表皮葡萄球菌ATCC 14990 和大腸埃希菌ATCC 25922 陰性。

[保存] 置4 ℃ 冰箱1 周內用完。

4 氧化酶試驗
［用途］

區別假單胞菌與氧化酶陰性的腸杆菌科細菌。

[配法]

鹽酸二甲基對苯二胺（或四甲基對苯二胺）0.1g 加蒸餾水10ml。

[用法]

取白色潔淨濾紙一角，沾取試驗菌落少許，加試劑一滴。陽性者立即顯粉紅色，並於5-10s 內呈現深紫色反應。若用四甲基對苯二胺則陽性為藍色。

[質量控製]

銅綠假單胞菌ATCC 27853 陽性；大腸埃希菌ATCC 25922 陰性。

[保存]

置棕色瓶內可用一周，4 ℃ 冰箱保存，或分裝於棕色瓶內密封。

5 尿素酶試驗培養基

［用途］

用於細菌尿素酶測定

[配法]

蛋白腖1g，葡萄糖1g ，氯化鈉5g，磷酸二氫鉀2g , 4g / L 酚紅溶液3ml，瓊脂18-20g, 200／L 尿素溶液100ml，蒸餾水1L 。

將前5 種成分混合於蒸餾水中，加熱溶解，校正pH 至7.0 ，然後加入酚紅溶液，分裝每瓶100ml，經121 ℃ 滅菌15min備用。臨用時，加熱溶解，冷卻至55 ℃ 左右，加入無菌的尿素溶液10ml，搖勻立即無菌分裝於滅菌試管，每支2 ml，並置成斜麵。經無菌試驗後備用。

［用法］

取培養物接種斜麵，35 ℃ 孵育24h 。尿素酶陽性者斜麵變紅色，陰性者顏色無變化。

[質量控製]

普通變形杆菌ATCC 13315 （8h ）整個培養基變紅、肺炎克雷伯菌ATCC 27236僅斜麵變紅（24h ) ；大腸埃希菌ATCC 25922 為陰性（24h ）。
[保存]

置4 ℃ 冰箱，2 周內用完

6 磷酸酶試驗培養基

[用途]

測定細菌產生磷酸酶的能力。用於區別葡萄球菌有無致病性，致病性葡萄球菌呈陽性。還有助於克雷伯菌屬與腸杆菌屬的鑒定。

[配法]

含磷酸酚酞的營養瓊脂培養基

將上述瓊脂加熱溶化，待冷卻至45 ℃ 時，加入濾過除菌的10g / L 磷酸酚酞溶液1 ml，搖勻後傾注平板。

[用法]

接種待測菌株，35 ℃ 培養18-24h 。在平皿蓋上滴加濃氨水1 滴，熏蒸片刻。如有酚酞釋出，菌落即變為粉紅色為陽性；不變色為陰性。

注：

（1）亦可用液體法進行試驗：經培養後在培養基內滴加氫氧化鈉溶液，觀察結果，顯紅色為陽性。

（2）以上為酸性磷酸酶的試驗方法。如果作堿性磷酸酶試驗，可將磷酸對硝基酚加入pH 10.5 、0.04mol／L 的甘氨酸氫氧化鈉緩衝液內。觀察結果時不必另行加堿。

（3）酚酞指示劑產生的顏色隨其pH 而變化，試劑的量要準確，太少或太多的堿均可引起假陽性或假陰性結果。

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