一、培養基用途:
用於副溶血性弧菌生化鑒定。
二、原理:
某些細菌可產生精氨酸脫羧酶,使精氨酸脫去羧基,生成精胺,從而使培養基變堿性並通過指示劑變色來觀察。脫羧酶是適應酶或稱誘導酶,對底物有特異性,在無相對氨基酸的培養基中不產生此酶,並且需要酸性環境和適宜溫度。故在培養基中加入葡萄糖,使細菌發酵葡萄糖產酸,以利於脫羧酶的產生。氨基酸的分解是在厭氧條件下進行,故在培養基表麵加液體石蠟。由於細菌發酵葡萄糖產酸,在培養初期培養基和對照培養基呈黃色,繼續培養時,若氨基酸經脫羧或水解產生胺類則培養基變堿,呈紫色或紫紅色,即為陽性反應;如至培養末期培養基如同對照管一樣均呈黃色,則判為陰性反應。
三、培養基成分
成分 |
含量(g/L) |
酵母浸粉 |
3.0 |
L-精氨酸 |
5.0 |
葡萄糖 |
1.0 |
溴甲酚紫 |
0.016 |
氯化鈉 |
30.0 |
pH 6.7±0.1 25℃ |
四、操作方法
1、用磨砂輪在安瓿瓶頸部劃線一圈,掰開待用;
2、將標準儲備菌株接種到非選擇性肉湯中或采用其他製備方法,製備成5 McFarland濁度(約109CFU/ml)的菌懸液;
3、吸取0.05ml-0.08ml(約1-2滴)菌懸液至3%NaCl精氨酸雙水解酶生化管生化管,36±1℃培養24±2h後,觀察試驗結果。
五、實驗結果
接種以下質控菌株,36±1℃培養24±2h:
質控菌株 |
菌株編號 |
生長情況 |
其他特征 |
副溶血性弧菌 |
ATCC17802 |
+++ |
陰性,黃色 |
普通變形杆菌 |
ATCC13315 |
+++ |
陰性,黃色 |
溶藻弧菌 |
ATCC17749 |
+++ |
陰性,黃色 |
阪崎腸杆菌 |
ATCC29004 |
+++ |
陽性,紫色 |
創傷弧菌 |
ATCC27562 |
+++ |
陰性,黃色 |
圖1 3%NaCl精氨酸雙水解酶生化管質控結果
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