生化試驗培養基——酶類測定培養基和試劑（下）

[用途]

測定細菌水解馬尿酸鈉能力。該培養基常用方法有2 種

(1)三氯化鐵法

[配法]

馬尿酸鈉1g ，肉湯100 ml。

三氯化鐵試劑：三氯化鐵12g溶於2 ％鹽酸100ml中。

將馬尿酸鈉和肉湯（pH 7.8 ）加熱溶解後分裝於試管中，每管4ml，121 ℃ 滅菌15 min 。冷卻後用玻璃蠟筆記錄培養基液麵，置冰箱中備用。

[用法]

取純菌接種培養基，35 ℃ 培養48h ，觀察培養基液麵。如液麵下降時以蒸餾水補充之。離心沉澱，取上清液0.8ml加入三氯化鐵試劑0.2ml，立即混勻。經10-30 min觀察結果，出現穩定沉澱物為陽性。反之為陰性。

2 茚三酮法：

甘氨酸在茚三酮的作用下，經氧化脫氨基反應，生成氨、二氧化碳和相應的醛。而茚三酮則生成還原型茚三酮。反應過程中形成的氨和還原型茚三酮，與殘留的茚三酮起反應，形成紫色化合物。

8.觸酶試驗培養基

[用途]

用於鏈球菌及革蘭陽性球菌初步分群。

[用法]

（1）玻片法：取18-24h 培養物，置於清潔玻片上，加1 滴3 ％過氧化氫溶液，如產生大量氣泡為陽性。

(2)試管法：取瓊脂斜麵（不含血液的）18-24h 培養物，接種於試管內，加入3 ％過氧化氫溶液1ml，如產生大量氣泡為陽性。

[質量控製]

金黃色葡萄球菌ATCC 25923 陽性；無乳鏈球菌ATCC 13813 陰性。

9. β-半乳糖普（ONPG ）試驗培養基

［用途］

用於乳糖遲緩發酵菌和不發酵菌的鑒別。

[配法]

試劑甲為0.01mol / L pH7.0

磷酸氫二鈉緩衝液100ml；

試劑乙為蛋白腖3g ，氯化鈉1.5g，蒸餾水300ml，pH 7.0。

將試劑甲、乙分別置121 ℃ 滅菌15min ，冷至40-50 ℃ 左右，試劑乙加入ONPG 0.6g ，置56 ℃ 水浴中加熱溶解，無菌過濾，將過濾液與試劑甲液合並分裝試管，每管2ml，做無菌試驗後備用。

[用法]

將標本接種培養基，35 ℃ 培養4-18h 。培養基呈黃色者為陽性，不變黃色為陰性。

[質量控製]

大腸埃希菌ATCC 25922 陽性；普通變形杆菌ATCC 13315 陰性。

注：ONPG 溶液不穩定，若培養基呈黃色即不可使用。

10 苯丙氨酸試驗培養基

[用途］

苯丙氨酸脫氨酶是變形杆菌屬、普羅威登斯菌屬和摩根菌屬所特有，可與腸杆菌科及其它細菌區別。也有助於種的鑒別，如苯丙酮酸莫拉菌呈陽性，其它莫拉菌屬的菌種呈陰性、

[配法]

DL-苯丙氨酸2g ，氯化鈉5g，酵母浸膏3g ，磷酸氫二鈉1g ，瓊脂12g ,蒸餾水1L 。

除瓊脂外其它的成分加熱溶解，調pH 至7.3，再加入瓊脂溶解後分裝每管約4ml高壓滅菌121 ℃ 15min置成斜麵，凝固後4 ℃ 冰箱保存，備用。

［用法］

取18-24h 培養物，大量接種於培養基，35 ℃ 孵育18-24h 後在培養試管中加入100g / L 三氯化鐵試劑4-5 滴，轉動使試劑布滿斜麵，陽性者呈綠色，陰性者呈黃色。

[質量控製]

普通變形杆菌ATCC 13315 陽性；大腸埃希菌ATCC 25922 陰性

[保存]

置4 ℃ 冰箱保存，2 周內用完。試劑可保存3 月。

注：

（1）苯丙氨酸試驗須在加入三氯化鐵試劑後立即觀察，因綠色易很快褪去，無論陽性或陰性結果都必須在5min內作出判斷

( 2 ）將斜麵試管轉動，讓三氯化鐵試劑流動，可使反應較決顏色亦較明顯。

11 澱粉培養基

［用途］

用於鏈球菌和白喉棒狀杆菌的分型鑒定

[配法]

蛋白腖5g，牛肉浸膏3g，瓊脂（肉場培養基中不加）20g ，氯化鈉5g，蒸餾水1L ，可溶性澱粉20g ，小牛血清50ml。

準確稱量前4 種成分加入500ml蒸餾水，緩漫加熱溶解製成基礎培養基。再將20g澱粉溶於250ml蒸餾水中。天然澱粉微溶於水，並不耐熱，切勿煮沸過度，防止澱粉水解。將上述兩種溶液合並混勻，補足水至1L 調pH 至7.2 , 121 ℃ 滅菌15min ，傾注平板備用。

附：Lugol碘液配製

（1）貯存液：將碘化鉀10g 溶於100ml蒸餾水中，緩漫加入5g結晶碘不斷研磨振蕩直至溶解，裝入棕色瓶中。

（2）應用液：用蒸餾水將貯存液1 : 5 稀釋，分裝於棕色瓶中，每隔1 月需新配製1 次，溶液呈深黃色

[用法]

取18-24h 純培養物接種瓊脂平板，一般可接種幾個培養物。置35 ℃ 孵育。18-24h 或者直至出現足夠的生長物。將Lugol碘液直接加到孵育過的平板上，培養基呈深藍色，菌落周圍有透明圈為陽性，菌落周圍無透明圈為陰性。 [質量控製]

無乳鏈球菌陽性；產氣腸杆菌陰性

［保存］

置4 ℃ 冰箱保存，2 周內用完。碘液易於褪色，使用前應進行質量控製。

注：

（1）傾注好的澱粉瓊脂平板不直放冰箱中保存，培養基會變為不透明，可影響結果判斷。建議將培養基置螺旋帽的試管中保存，臨用時加熱溶解傾注平板，冷卻後使用

（2）澱粉酶在pH 低於4.5 時不穩定

（3）配製時，避免過熱，否則澱粉顆粒自動分解導致假陽性結果

（4）培養時間應不少於36h

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