一、實驗目的
1、初步掌握微生物的分離、培養和菌種的基本方法。
2、練習微生物接種、移植和培養的基本技術，掌握無菌操作技術。
二、實驗原理
土壤是微生物生活的大本營，為了獲得某種微生物的純培養，一般是根據該微生物對營養、酸堿度、氧等條件要求不同，而供給它適宜的培養條件，或加入某種抑製劑，淘汰其他一些不需要的微生物，再用各種方法分離、純化該微生物，直至得到純菌株。
三、儀器設備
樣品：新鮮土壤。
培養基：滅菌的牛肉膏蛋白腖瓊脂培養基、高氏一號培養基、馬鈴薯蔗糖培養基。
無菌水：帶有玻璃珠裝有45mL無菌水三角瓶、裝有9mL無菌水的試管。
其它：無菌培養皿、無菌吸管、無菌三角玻棒、電子天平、記號筆、接種環、酒精燈、火柴。
試劑：1萬U/mL鏈黴素液、10％苯酚
四、相關知識點
接種方法：常用的有斜麵接種法、平板接種法、液體接種法、試管深層固體培養基的穿刺接種法。
接種工具：常用的有接種針、接種環、接種鉤、接種圈、接種鏟或接種鋤、玻璃塗棒等。
五、實驗步驟
（一）實驗程序1
製備土壤稀釋液：(無菌操作過程見教師示範）
1、稱取土壤5g，放入45mL無菌水的三角瓶中，振蕩10min，即為稀釋10－1的土壤懸液。
2、 另取裝有9mL無菌水試管5支，用記號筆編上10－2、10－3、10－4、10－5、10－6。取已稀釋成10－1的土壤液，振蕩後靜止0.5min，用無菌吸管吸取1mL土壤懸液加入10－2的無菌水的試管中，並在試管內輕輕吹吸數次，使之充分混勻，即成10－2土壤稀釋液。同法依次連續稀釋至10－4、10－5 、10－6土壤稀釋液。
吸取稀釋液
取一吸管，以無菌操作法分別吸取10－4、10－5、 10－6土壤稀釋液0.1mL，加在已製好的平板培養基上。
塗板
用玻璃刮鏟將稀釋液在培養機上充分混勻鋪平，倒置於恒溫箱培養。
計算出每克土壤中細菌的數量。
即用某一培養皿內真菌的菌落數乘以該培養皿接種液的稀釋倍數即得。
挑取單個菌落，進行劃線分離。
（二）實驗程序2
製平板
吸取稀釋液
取一吸管，以無菌操作法分別吸取10－4、10－5 、 10－6土壤稀釋液0.1mL，加在空培養皿中。
混菌
水平輕輕轉動培養皿，使菌液、培養基充分混勻鋪平，放在平坦的桌麵上，凝固後倒置於恒溫培養箱培養。
計算出每克土壤中放線菌的數量。
挑取單個菌落，進行劃線分離。
（三）實驗程序3
製成平板。
凝固後，用接種環取相應的菌液一環（10－1）在平板上劃線。
1、連續劃線法：將挑取有樣品的接種環在平板培養基表麵作連續劃線。完畢後，倒置於28～300C溫室培養。
2、分區劃線法：用接種環以無菌操作挑取土壤稀釋液1環，先在培養基的一邊作第一次平行劃線3—4條，再轉動培養皿約600C角，並將接種環上剩餘物燒掉，待冷卻後通過第一次劃線部分作第二次劃線會，同法依次作第三次和第四次劃線。劃線完畢，蓋上皿蓋，倒置於溫室培養。
挑取單個菌落接種於斜麵培養基上，如果不純，再移植純化，最後得到純培養。
六、實驗報告要求
1、根據實驗要求，在實驗時間內到實驗室進行實驗時，一邊測量，一邊記錄實驗數據。報告要求準確、美觀。
2、 在實驗中，如果發生實驗測量數據與事先的計算數值不符，甚至相差過大，此時應該找出原因，不能不了了之。同時要把通過實驗所測量的數據與計算值加以比較，如果誤差一般5％以下。
3、在報告的最後要完成指導書上要求解答的思考題。
七、思考題
1、平板培養時為什麽要把培養皿倒置？
2、在劃線分離時，為什麽每次都需要將接種環上的剩餘物燒掉？
上一篇：培養基的製備
下一篇：臨床標本采集、處理與檢測（1）
