（二）實驗原理：細菌的鞭毛極細，直徑一般為10—20nm，隻有用電子顯微鏡才能觀察到。但是，如采用特殊的染色法，則在普通光學顯微鏡下也能看到它。鞭毛染色方法很多，但其基本原理相同，即在染色前先用媒染劑處理，讓它沉積在鞭毛上，使鞭毛直徑加粗，然後再進行染色。常用的媒染劑由丹寧酸和氯化高鐵或鉀明礬等配製而成。現推薦以下兩種染色法。
（三）實驗器材
1.活材料：培養12-16h的水稻黃單胞菌（Xanthomonas oryzae），粘質賽氏杆菌（Serratia marcescens）或假單細胞菌（Pseudomonas sp.）斜麵菌種。
2.染色液和試劑：硝酸銀染色液、Leifson染色液、香柏油、二甲苯。
3.器材：載玻片、擦鏡紙、吸水紙、記號筆、玻片擱架、鑷子、接種環，顯微鏡。
（四）實驗方法
1.鍍銀法染色
（1）清洗玻片 選擇光滑無裂痕的玻片，最好選用新的。為了避免玻片相互重疊，應將玻片插在專用金屬架上，然後將玻片置洗衣粉過濾液中（洗衣粉煮沸後用濾紙過濾，以除去粗顆粒），煮沸20min。取出稍冷後用自來水衝洗、晾幹，再放入濃洗液中浸泡5—6天，使用前取出玻片，用自來水衝去殘酸，再用蒸餾水洗。將水瀝幹後，放入95%乙醇中脫水。
（2）菌液的製備及製片：菌齡較老的細菌容易失落鞭毛，所以在染色前應將待染細菌在新配製的牛肉膏蛋白腖培養基斜麵上（培養基表麵濕潤，斜麵基部含有冷凝水）連續移接3-5代，以增強細菌的運動力。最後一代菌種放恒溫箱中培養12—16h。然後，用接種環挑取斜麵與冷凝水交接處的菌液數環，移至盛有1—2mL無菌水的試管中，使菌液呈輕度混濁。將該試管放在
用於鞭毛染色的菌體也可用半固體培養基培養。方法是將0.3-0.4%的瓊脂肉膏培養基熔化後倒入無菌平皿中，待凝固後在平板中央點接活化了3-4代的細菌，恒溫培養12-16h後，取擴散菌落的邊緣製作塗片。
（3）染色
①滴加A液，染4—6min。
②用蒸餾水充分洗淨A液。
③用B液衝去殘水，再加B液於玻片上，在酒精燈火焰上加熱至冒氣，約維持0.5—1min（加熱時應隨時補充蒸發掉的染料，不可使玻片出現幹涸區）。
④用蒸餾水洗，自然幹燥。
（4）鏡檢：先低倍，再高倍，最後用油鏡檢查。
結果：菌體呈深褐色，鞭毛呈淺褐色。
2.改良Leifson染色法
（1）清洗玻片法同1。
（2）配製染料 染料配好後要過濾15-20次後染色效果才好。
（3）菌液的製備及塗片
①菌液的製備同1。
②用記號筆在潔淨的玻片上劃分3—4個相等的區域。
③放1滴菌液於第一個小區的一端，將玻片傾斜，讓菌液流向另一端，並用濾紙吸去多餘的菌液。
④幹燥 在空氣中自然幹燥。
（4）染色
①加染色液於第一區，使染料覆蓋塗片。隔數分鍾後再將染料加入第二區，依此類推（相隔時間可自行決定），其目的是確定最合適的染色時間，而且節約材料。
②水洗：在沒有傾去染料的情況下，就用蒸餾水輕輕地衝去染料，否則會增加背景的沉澱。
③幹燥：自然幹燥。
（5）鏡檢 先低倍觀察，再高倍觀察，最後再用油鏡觀察，觀察時要多找一些視野，不要企圖在1-2個視野中就能看到細菌的鞭毛。
結果：菌體和鞭毛均染成紅色。
（五）實驗作業：給出鞭毛菌的形態圖
（六）注意事項
1.鍍銀法染色比較容易掌握，但染色液必須每次現配現用，不能存放，比較麻煩。
2.Leifson染色法受菌種、菌齡和室溫等因素的影響，且染色液須經15-20次過濾，要掌握好染色條件必須經過一些摸索。
3.細菌鞭毛極細，很易脫落，在整個操作過程中，必須仔細小心，以防鞭毛脫落。
4.染色用玻片幹淨無油汙是鞭毛染色成功的先決條件。
附：細菌的運動性觀察
（一）實驗原理 細菌是否具有鞭毛是細菌分類鑒定的重要特征之一。采用鞭毛染色法雖能觀察到鞭毛的形態、著生位置和數目，但此法既費時又麻煩。如果僅須了解某菌是否有鞭毛，可采用懸滴法或水封片法（即壓滴法）直接在光學顯微鏡下檢查活細菌是否具有運動能力，以此來判斷細菌是否有鞭毛。此法較快速、簡便。
懸滴法就是將菌液滴加在潔淨的蓋玻片中央，在其周邊塗上凡士林，然後將它倒蓋在有凹槽的載玻片中央，即可放置在普通光學顯微鏡下觀察。水封片法是將菌液滴在普通的載玻片上，然後蓋上蓋玻片，置顯微鏡下觀察。
大多數球菌不生鞭毛，杆菌中有的有鞭毛有的無鞭毛，弧菌和螺菌幾乎都有鞭毛。有鞭毛的細菌在幼齡時具有較強的運動力，衰老的細胞鞭毛易脫落，故觀察時宜選用幼齡菌體。
（二）實驗器材
1.活材料：培養12-16h小時的枯草杆菌（Bacillus subtilis）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、假單胞菌（Pseudomonas sp.）。
2.試劑：香柏油、二甲苯、凡士林等。
3.器材：凹載玻片、蓋玻片、鑷子、接種環、滴管、擦鏡紙、顯微鏡。
（三）實驗方法：
1.製備菌液：在幼齡菌斜麵上，滴加3-4mL無菌水，製成輕度混濁的菌懸液。
2.塗凡士林：取潔淨無油的蓋玻片1塊，在其四周塗少量的凡士林。
3.滴加菌液：加1滴菌液於蓋玻片的中央，並用記號筆在菌液的邊緣做一記號，以便在顯微鏡觀察時，易於尋找菌液的位置。
4.蓋凹玻片 將凹玻片的凹槽對準蓋玻片中央的菌液，並輕輕地蓋在蓋玻片上，使兩者粘在一起，然後翻轉凹玻片，使菌液正好懸在凹槽的中央，再用鉛筆或火柴棒輕壓蓋玻片，使玻片四周邊緣閉合，以防菌液幹燥。
若製水封片，在載玻片上滴加一滴菌液，蓋上蓋玻片後即可置顯微鏡下觀察。
5.鏡檢 先用低倍鏡找到標記，再稍微移動凹玻片即可找到菌滴的邊緣，然後將菌液移到視野中央換高倍鏡觀察。由於菌體是透明的，鏡檢時可適當縮小光圈或降低聚光器以增大反差，便於觀察。鏡檢時要仔細辨別是細菌的運動還是分子運動（即布朗運動），前者在視野下可見細菌自一處遊動至他處，而後者僅在原處左右擺動。細菌的運動速度依菌種不同而異，應仔細觀察。
結果：有鞭毛的枯草杆菌和假單胞菌可看到活躍的運動，而無鞭毛的金黃色葡萄球菌不運動。
（四）實驗作業：繪出所看到的細菌的形態圖，並用箭頭表示其運動方向。
（五）注意事項
1.檢查細菌運動的載玻片和蓋玻片都要潔淨無油，否則將影響細菌的運動。
2.製水封片時菌液不可加得太多，過多的菌液會在蓋玻片下流動，因而在視野內隻見大量的細菌朝一個方向運動，從而影響了對細菌正常運動的觀察。
3.若使用油鏡觀察，應在蓋玻片上加香柏油一滴。
編者注：由於二甲苯對身體有害，可用無水乙醇：無水乙醚＝2：8或3：7代替，乙醚由麻醉作用，對身體亦有害，隻是相對更好，且可以更好地保護鏡頭。
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