細菌生化反應培養基

1.    糖、醇發酵培養基

（1）成分

基礎液

蛋白腖                   10ml

氯化鈉                 5g

0.5%酸性品紅指示液     10ml （或0.4％溴麝香草酚藍指示液）( 6 ml )

水                     1000ml

糖、醇類  每100ml 基礎液內各加0.5g

（2）製法 
      取蛋白腖和氯化鈉加入水中，微溫使溶解，調pH 值使滅菌後為7.3±0.1，加入指示液混勻。每100ml 分別加人l 種糖、醇或糖苷，混勻後分裝於小管中（若需觀察產氣反應，在小管內另放置杜漢小倒管）。於116 ℃ 滅菌15 分鍾。
    常用的糖、醇或糖苷：阿拉伯糖、木糖、鼠李糖、葡萄糖、果糖、甘露糖、半乳糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖、蕈糖、纖維二糖、蜜二搪、棉子糖、鬆三糖、菊糖、糊精、澱粉、甘露醇、衛矛醇、山梨醇、肌醇、甘油、水楊素、七葉苷等。
（3）用途 
      鑒別各種細菌對糖類的發酵生化反應，發酵者產酸，培養基變色（加酸性品紅者由無色至紅色或再至黃色；加溴麝香草酚藍者由藍色至黃色）；產氣時，小倒管內有小氣泡。
2 ．七葉苷培養基
（1）成分

蛋白腖           5g

七葉苷           3g

磷酸氫二鉀       1g

水               1000ml

枸櫞酸鐵         0.5g
( 2 )製法 
      除七葉苷外，取上述成分混合，微溫使溶解，加入七葉苷混勻，調pH 值使滅菌後為7.3 士0.1，分裝於試管中，121 ℃ 滅菌15 分鍾。
( 3 )用途   用於鑒別細菌對七葉苷的水解試驗，產生棕黑色沉澱為陽性反應。
3 ．磷酸鹽葡萄糖腖水培養基
( 1 ）成分

蛋白腖          7g

葡萄糖          5g

磷酸氫二鉀      3.8g

水              1000ml
( 2 )製法   取上述成分混合，微溫使溶解，調pH值使滅菌後為7.3 士0.1 ，分裝於小試管中，121 ℃ 滅菌15 分鍾。
( 3 )用途   用於鑒別細菌的甲基紅試驗（M-R 反應）和乙酰甲基甲醇試驗（V-P 反應）。
     1甲基紅試驗（M-R 反應）取可疑菌落或斜麵培養物，接種於磷酸鹽葡萄糖腖水培養基中，置35 ℃ 培養2 ～ 5 天，於培養管內加人甲基紅指示液（稱取甲基紅0.1g，加95 ％乙醇300ml，使溶解後，加水至500ml）數滴，立即觀察，呈鮮紅色或橘紅色為陽性，呈黃色為陰性。

2乙酰甲基甲醇生成試驗（V-P 反應）   取可疑菌落或斜麵培養物，接種於磷酸鹽葡萄糖腖水培養基中，置35 ℃ 培養48 小時，量取2ml 培養液，加入α-萘酚乙醇試液（稱取α－萘酚5g ，加無水乙醇溶解使成100ml ) 1ml , 混勻，再加40％氫氧化鉀溶液0.4ml ，充分振搖，立刻或數分鍾內出現紅色，即為陽性反應；無紅色反應為陰性，如為陰性反應，置35 ℃ 水浴4 小時後再觀察。
4 ．蛋白腖水培養基
( l )成分

蛋白腖        10g

水             l000ml

氯化鈉         5g
( 2 )製法  取上述成分混合，微溫使溶解，調pH 值使滅菌後為7.3 士0.1 ，分裝於小試管，121 ℃ 滅菌15 分鍾。
( 3 )用途   用於鑒別細菌能否分解色氨酸而產生靛基質的生化反應。

① 靛基質試驗取可疑菌落或斜麵培養物，接種於蛋白腖水培養基中，置35 ℃ 培養24～48 小時，必要時培養4～5 天，沿管壁加人靛基質試液數滴，液麵呈玫瑰紅色為陽性，呈試劑本色為陰性。
        ② 靛基質試液   稱取對二甲氨基苯甲醛5g ，加入戊醇（或異戊醇）75ml ，充分振搖，使完全溶解後，再取鹽酸25ml 徐徐滴入，邊加邊振搖，以免驟熱導致溶液色澤變深．或稱取對二甲氨基苯甲醛1g ，加人95 ％乙醇95ml ，充分振搖，使完全溶解後，再取鹽酸20ml 徐徐滴入。
5 ．三糖鐵瓊脂培養基
( l ）成分

蛋白腖              20g

硫酸亞鐵            0.2g

牛肉浸出粉          5g

硫代硫酸鈉          0.2g

乳糖                10g

002％酚磺酞指示液   12.5ml

蔗糖                10g

瓊脂                12～15g

葡萄糖              1g

水                  1000ml

氯化鈉              5g

 ( 2 )製法   除乳糖、蔗糖、葡萄糖、指示液、瓊脂外，取上述成分，混合，加熱使溶解，調pH 值使滅菌後為7.3 士0.1 ，加入瓊脂，加熱溶脹後，再加入其餘成分，搖勻，分裝，121 ℃ 滅菌15 分鍾，製成高底層（2 ～3cm ) 短斜麵。
( 3 )用途  用於初步鑒別腸杆菌科細菌對糖類的發酵反應和產生硫化氫試驗。

方法和結果觀察：取可疑菌落或斜麵培養物，做高層穿刺和斜麵劃線接種，置35 ℃ 培養24～ 48 小時，觀察結果。培養基底層變黃色為葡萄糖發酵陽性，斜麵層變黃色為乳糖、蔗糖發酵陽性；底層或整個培養基呈黑色表示產生硫化氫。
6.克氏雙糖鐵瓊脂培養基
( l )成分

蛋白腖              20g

枸櫞酸鐵            0.3g

牛肉浸粉            3g

硫代硫酸鈉          0.3g

酵母浸粉            3g

002 ％酚磺酞指示液  12 .5ml

乳糖                10g

瓊脂                12～15g

葡萄糖              1g

水                  1000ml

氯化鈉               5g
( 2 )製法   除乳糖、葡萄糖、指示液、瓊脂外，取上述成分，混合，加熱使溶解，調pH 值使滅菌後為7.3 士0.1 , 加入瓊脂，加熱溶脹後，再加入其餘成分，搖勻，分裝，121 ℃ 滅菌15 分鍾，製成高底層（2～ 3cm ）短斜麵。
( 3 )用途  用於初步鑒別腸杆菌科細菌對糖類的發酵反應和產生硫化氫試驗。

方法和結果觀察：取可疑菌落或斜麵培養物，做高層穿刺和斜麵劃線接種，置35 ℃ 培養24～ 48 小時，觀察結果。培養基底層變黃色為葡萄糖發酵陽性，斜麵層呈黃色為乳糖發酵陽性，斜麵層呈紅色為乳糖發酵陰性；底層或整個培養基呈黑色表示產生硫化氫。
7.脲（尿素）培養基
( 1 )成分

蛋白腖                   1g

 0.2 ％酚紅溶液          6ml

葡萄糖                   1g

20%無菌脲溶液            l00ml

氯化鈉                   5g

水                       1000ml

磷酸氫二鉀               2g
( 2 )製法  除脲溶液外，取上述成分，混合，調pH 值使滅菌後為6.9 士0.1 ，混勻後，121 ℃ 滅菌15 分鍾，冷至50 ～ 55 ℃ ，加人無菌脲溶液（經膜除菌過濾），混勻，分裝於滅菌試管中。
( 3 )用途   用於鑒別細菌的尿素酶反應。

方法和結果觀察：取可疑菌落或少量斜麵培養物接種於培養基內，置35 ℃ 培養24 小時，觀察結果。培養基變為紅色為尿素酶反應陽性；不變色為陰性，陰性者需延長觀察至1 周。
8 ．苯丙氨酸瓊脂培養基
( 1 )成分

磷酸氫二鈉                            1g

氯化鈉                                5g

酵母浸膏                              3g

瓊脂                                  12 ～ 15g

DL-苯丙氨酸（DL -  phenylalanine )      2g （或L-苯丙氨酸）( 1g )

水                                    1000ml 
( 2 )製法   除瓊脂外，取各成分溶於水，調pH 值使滅菌後為7.3 士0.1 ，再加入瓊脂，加熱溶脹，分裝試管，121 ℃ 滅菌15 分鍾，製成長斜麵。
( 3 )用途用於鑒別細菌的苯丙氨酸脫氨酶試驗（也稱苯丙酮酸試驗）。

方法和結果觀察：取斜麵培養物，大量接種於苯丙氨酸瓊脂斜麵，置35℃培養4 小時或18～ 24 小時，取4～ 5 滴10 ％三氯化鐵溶液試劑，由斜麵上部流下，若出現墨綠色，即為苯丙氨酸脫氨酶試驗陽性；倘若不變色則為陰性。
9.氨基酸脫羧酶試驗培養基
( 1 ）成分

①    基礎液

蛋白腖                      5g

1.6    ％溴甲酚紫指示液        lml

酵母浸出粉                  3g

水                          1000ml

葡萄糖                      1g

② 氨基酸

L－賴氨酸                    0.5g （需加堿溶液溶解）

L-鳥氨酸                     0.5g（需加堿溶液溶解）

L-精氨酸                     0.5g（不需加堿溶液溶解）

( 2 )製法  先配製基礎液備用；將溶解後的3 種氨基酸，各分別加至100ml 基礎液（使氨基酸的終濃度為0.5 % ) ，混勻，調pH 值使滅菌後為6.8 。分裝於小試管中，每管2.5ml 並滴加1 層液體石蠟；同時分裝一部分基礎液於小試管，作為對照培養基，均置116 ℃ 滅菌10 分鍾。
( 3 )用途  用於鑒別細菌的脫羧酶、雙水解酶試驗。
     方法和結果觀察：取疑似菌斜麵培養物分別接種於上述3 種培養基及基礎液對照培養基，置35 ℃ 培養24 ～ 48 小時。在培養初期由於待檢細菌發酵葡萄糖產酸，試驗培養基和對照培養基應呈黃色，繼續培養時，試驗培養基如呈紫色或紫紅色，即為陽性反應；如至培養末期，培養基仍同對照管呈黃色，則判為陰性反應。
10.明膠培養基
( l )成分

蛋白腖         5g

明膠           120g

牛肉浸出粉     3g

水             1000ml
( 2 )製法   取上述成分加人水中，浸泡約20 分鍾，加熱溶解，調pH 值使滅菌後為7.3 士0.1 ，分裝於小試管中，121 ℃ 滅菌15 分鍾。
( 3 )用途   用於細菌的明膠液化試驗。

方法和結果觀察：取少量待檢菌斜麵培養物穿刺接種於明膠培養基內，置35 ℃ 培養24 小時，取出置冰箱內10～  20 分鍾。如培養基仍呈溶液狀，則為陽性； 培養基重新凝固，則為陰性。細菌液化明膠之作用有時甚為緩慢，如未見液化，需繼續培養1 ～ 2 周方可確定陰性。
11 ．丙二酸鈉培養基
( 1 )成分

酵母浸出粉                1g

磷酸二氫鉀                0.4g

氯化鈉                    2g

丙二酸鈉                  3g

葡萄糖                    0.25g

0.4 ％溴麝香草酚藍指示液  6ml

硫酸銨                    2g

水                        l000ml

磷酸氫二鉀                0.6g
( 2 ) 製法   除指示液外,將上述成分溶解，調pH 值使滅菌後為6.8 ，再加入指示液。分裝小管中．121 ℃ 滅菌15分鍾。
( 3 )用途  用於鑒別細菌能否利用丙二酸鈉作為碳源而生長繁殖。
     方法和結果觀察：取斜麵或肉湯培養物接種於丙二酸鈉培養基內，置35 ℃ 培養48 小時．於24 小時和48 小時後各觀察1 次結果。培養基顏色由綠色變成藍色為陽性反應；無顏色變化，或由綠色變成黃色，則為陰性反應。
12 .枸櫞酸鹽培養基
( 1 )成分

氯化鈉                     5g

枸櫞酸鈉（無水）           2g

硫酸鎂                     0.2g

1.0 ％溴麝香草酚藍指示液   10ml

磷酸氫二鉀                 1g

瓊脂                       14g

磷酸二氫銨                 1g

水                          l000ml
( 2 )製法  除指示液和瓊脂外，取上述成分，混合，微溫使溶解，調pH 值使滅菌後為6.9 士0.1 ，加入瓊脂，加熱溶脹，然後加入指示液，混勻，分裝於小試管中，121 ℃ 滅菌15 分鍾，製成斜麵．
（3 ）用途  用於鑒別細菌能否利用枸櫞酸鹽作為碳源和氮源而生長繁殖。
    方法和結果觀察：取可疑菌落或斜麵培養物，接種於枸櫞酸鹽培養基的斜麵上，一般培養48 ～ 72 小時，凡能在培養基斜麵生長出菌落，培養基即由綠色變成藍色者為陽性反應；無菌落生長，培養基仍綠色者為陰性反應，陰性反應者應繼續培養觀察至7 天。
13．硝酸鹽腖水培養基
（1）成分

蛋白腖        10g

硝酸鉀        2 g

酵母浸出粉    3g

水            1000ml
( 2 )製法  取上述成分，加熱溶解，調pH 值使滅菌後為7.3 士0.1 ，分裝於小試管中，121 ℃ 滅菌15 分鍾。
( 3 )用途   用於鑒別細菌能否還原硝酸鹽成亞硝酸鹽。
    方法和結果觀察：取待檢菌培養物接種於硝酸鹽腖水培養基中，置35 ℃ 培養24 小時。將下列甲液和乙液於用前等量混合，每個培養物加混合物0.1 ml，產生紅色為陽性反應，不產生紅色為陰性反應。

甲液：稱取α－萘胺5g，溶解於5mol / L 醋酸l000ml 中。

乙液：稱取磺胺酸（對氨基苯磺酸）8g ，溶解於5mol / L 醋酸1000ml 中。
14 ．石蕊牛奶培養基
( l )成分

脫脂奶粉       10g

水             100ml

10 ％石蕊溶液  0.65ml
( 2 )製法   取上述成分混勻後，分裝於小試管中．116 ℃ 滅菌10 分鍾，
( 3 )用途   用於檢查細菌對牛奶的凝固和發酵作用。
15.半固體營養瓊脂培養基
( l )成分

蛋白腖        10g

瓊脂          4g

牛肉浸出粉    3g

水            l000ml

氯化鈉        5g
( 2 )製法除瓊脂外，取上述成分，混合，微溫使溶解，調pH 值使滅菌後為7.2 士0.2 ，再加入瓊脂，加熱溶脹，分裝於小管中，121 ℃ 滅菌15 分鍾後，直立放置。待凝固後備用
( 3 )用途  用於觀察細菌的動力，也可用於一般菌種的保存。

細菌動力檢查：取疑似菌斜麵培養物穿刺接種於半固體營養瓊脂培養基中，置35 ℃ 培養24小時，細菌沿穿刺外周擴散生長．為動力陽性；否則為陰性。陰性者，應再繼續培養觀察2 ～ 3 天。 

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