細菌檢驗工作的基本技術——嗜血杆菌屬

    1．與相關菌屬、種的鑒別：嗜血杆菌屬常與放線菌屬、艾肯菌屬、心杆菌屬、金氏菌屬相鑒別，見下表。

表                 嗜血杆菌屬菌種與相關菌種鑒別試驗

 

2．屬內鑒別可利用分離培養時，對X、 V因子的需要和溶血性可初步區別不同的嗜血杆菌種。

    進一步的鑒別可通過生化試驗來確定到種。流感嗜血杆菌發酵木糖，與埃及嗜血杆菌木糖不發酵相區別。杜克雷嗜血杆菌有特殊臨床來源，所以較易診斷。屬內種的鑒別見下表。

表                         嗜血杆菌屬中種的特征

注：a．包括埃及嗜血杆菌；D．不同結果；w．弱發酵反應

       b．ONPG，O-硝基酚-β-D半乳糖吡喃苷。

   

(1) 流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌的鑒定。

    用金黃色葡萄球菌作“衛星”試驗陽性。但應注意“副流感”隻需V因子即生長。可同時用M—H平板作衛星試驗，能在M—H平板呈衛星生長的菌可否定流感嗜血杆菌。二者也可用糖發酵試驗加以鑒別。

    (2) 作為院內感染病源追蹤的流行病學的需要，對流感、副流感嗜血杆菌須鑒定到型。可用吲哚、尿素、鳥氨酸3個試驗將“流感嗜血杆菌”分為8個生物型(詳見表)，或用血清學進行分型。

表                 流感嗜血杆菌及副流感嗜血杆菌生物型鑒別

 注：a．埃及嗜血杆菌與流感嗜血杆菌Ⅲ生物型主要生化特性相似，二者區別參考有關資料。

1．  衛星試驗：挑取可疑菌落密塗劃種於血平板上或M—H平板上，再將金黃色葡萄球菌點種或劃種其上，35℃24h孵育。如葡萄球菌菌落鄰近處被檢菌的菌落較大，遠離葡萄球菌菌落處的菌落小或不生長，即“衛星”試驗陽性。在血平皿上劃上葡萄球菌時，X，V因子都具備，在M-P,平板上接種葡萄球菌、隻具備V因子。

2．  糖發酵試驗

   培養基：1％糖的酚紅肉湯，並補充所需生長因子，方法參考奈瑟菌鑒定。

3．  吲哚(快速法)試驗：在pH 6.8的磷酸緩衝液(0.05mol)中，加0.1％的L-色氨酸。大量接種被檢菌，孵育4h後，加Kovacs試劑。

4．  尿素酶試驗

   培養基：

      KH₂PO₄                        0.1g

K₂HPO₄                        0.1％

NaCl                            0.5g

0.2％酚紅水溶液       0.5ml

蒸餾水                      100ml