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器材準備 - 組織培養 - 病毒的培養



錄入時間:2009-6-24 9:42:08 來源:青島betway必威西汉姆联

 
1.玻璃器皿〖HT〗組織培養用的玻璃器皿要求比較嚴格,要用耐酸、耐熱和透明度強的中性硬質玻璃,尤其是培養組織細胞用的瓶子,更應注意質量,而且表麵應平坦光滑,以利於細胞貼壁增殖和觀察。用過的玻璃器皿用清水衝洗後,放在以優質洗衣粉配成的1%水溶液內蒸煮半小時,隨後洗刷,並用清水和雙餾水分別衝洗5~6遍以上,再浸泡在雙餾水中1天以上。此後撈出,並用去離子水衝洗3~4遍以後,晾幹或烤幹,等待包紮和滅菌。新購的玻璃器皿,在清除汙物和晾幹後,浸泡於硫酸-重鉻酸鉀清洗液內1天以上,撈出,用清水衝洗後,再按上述方法洗刷,衝淨。帶毒的玻璃器皿需先浸泡於5%來蘇液或1%鹽酸溶液(依病毒種類而定)中1天以上或高壓消毒,此後再按上法洗刷和衝淨。洗刷晾幹的玻璃器皿,經妥善包裝後,以160~170℃幹熱2小時的方法滅菌。
 
2.塑料製品〖HT〗細胞培養瓶(管、板)的塑料化,已是必然的發展趨勢。用於組織培養的塑料製品多以優質聚苯乙烯為原料,隨用途製成各種不同的形狀和規格,其成品均經無菌包裝,工作時可直接啟封使用,既方便又省力。通常這些塑料製品多為一次性使用,但為了節約也可重複利用。用過的染毒培養板,通常浸泡於5%甲醛溶液中過夜消毒。塑料製品的洗刷方法與玻璃製品相同,但滅菌方法不同。即將清洗晾幹後的器皿,浸入細胞培養用水配製的70%濃度的高純度乙醇溶液中,至少浸泡24小時,臨用前撈出,甩淨培養瓶內的殘液,包以滅菌的牛皮紙後,置37℃溫箱內,待其完全幹燥後即可使用。這種滅菌方法並不十分確實,有時出現汙染。培養板(皿)置於紫外燈下(距離20~30cm)照射消毒,時間為05~1小時,照射後即刻使用。
 
3.橡皮製品〖HT〗應選用對細胞毒性較小的軟質橡皮管和橡皮塞。新購的橡皮製品先在2%的氫氧化鈉溶液內煮15分鍾,以自來水衝洗後再用4%的鹽酸溶液煮15分鍾。橡皮管在煮時務使管內不含氣泡。用自來水和雙餾水分別衝冼5~7遍後再浸泡在雙餾水中1天以上,隨後撈出,用去離子水衝洗2~3遍後,晾幹包裝。15磅高壓滅菌20分鍾。用過的橡皮製品先經高壓或煮沸1小時滅菌,隨後在以優質洗衣粉配成的1%水溶液內煮半小時,再用刷子刷淨,自來水衝冼數遍後用雙餾水衝冼1遍,並於雙餾水中浸泡1天以上,隨後撈出,用去離子水衝洗2~3遍後,如上晾幹包裝和滅菌。
 
4.濾器〖HT〗常用的有蔡氏濾器、玻璃濾器和微孔濾膜。(1)蔡氏濾器:由石棉板製成,夾於金屬器中使用。一般可分為大孔徑的K型,用於去除較大的顆粒和雜質;孔徑較小的EK型則用以除菌。這種濾器適於濾過大量樣品,先用K型濾過澄清,後用EK型濾過除菌,以免堵塞濾板。(2)玻璃濾器:係用均一的玻璃粉末燒結而成的多孔性濾板。國內產品按孔徑大小分為G1、G2、G3、G4、G5和G6等幾型。G1~G4型的孔徑為5~200μm,G5型的孔徑為15~25μm,G6型的孔徑在15μm以下。上述型號大致相當於國外的EC(170~220μm)、C(40~60μm)、M(10~15μm)、F(4~55μm)、VF(2~25μm)、UF(09~14μm)。通常應用G1~G4型作初濾澄清之用,G5型可部分除菌,G6型則作過濾除菌用。玻璃濾器最常用於培養液的過濾除菌。新購置的玻璃濾器先用清水洗淨。待幹後,於濾器的玻璃鬥內裝滿硫酸-重鉻酸鉀清洗液,下接濾瓶,讓清洗液自然滴落至盡,隨後加入1mol/LNaOH液,也任其自然滴落。此後用餾水充分衝洗後,再裝滿餾水,並在下麵的濾瓶上接抽氣機,造成負壓使餾水不斷通過濾板。隨時補加餾水,約5~6次。最後再加三餾水或去離子水,也用負壓抽濾。測定濾液的pH,直至濾出的餾水的pH與加入時的餾水的pH相同。此時即可晾幹包裝,並高壓滅菌。(3)微孔濾膜:係用醋酸纖維酯和硝酸纖維酯的混合物製成的薄膜,具有025μm至10μm不同的孔徑。近年上海新亞淨化器械廠已生產出合格的孔徑02、03、045、065、080、12μm的多種濾膜,其直徑有25~180mm多種規格。除菌過濾可用孔徑02μm的薄膜。大孔徑濾膜可用於澄清。微孔濾膜安裝在特製的過濾器中使用,篩板的孔徑不得超過08mm。小量液體的除菌過濾,可用連接於注射器上的特殊小型濾膜過濾裝置,包裝滅菌後即可使用,極為方便適用。(4)濾器清洗法:用過的濾器必須立即處理。如果沾有傳染性物質,應將濾器和濾板煮沸或浸泡於消毒液內消毒(石棉板和濾膜在消毒處理後即行廢棄),再經清洗,包裝和滅菌後備用。玻璃濾器用過後,先用含1%-2%硝酸鈉比重為184的濃硫酸溶液抽洗數分鍾,再用餾水抽洗,然後用1∶1氨水溶液抽洗,以中和其酸性,最後用餾水徹底抽洗。當濾器沾汙較多蛋白質時,應在清洗前先置於pH85胰蛋白酶溶液中浸泡,在37℃下消化24小時後,再行抽洗。

 

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