組織培養,原來是指動物或植物組織小塊的體外培 養。這個名稱現在用以泛指體外的組織、器官和細胞培養,是分離和培養病毒以及進行病毒 學實驗研究的簡便而有效的工具和手段。病毒在細胞內的增殖及其對細胞的作用,可以根據 細胞病變、細胞培養物內出現血凝素或其他病毒抗原、紅細胞吸附現象以及通過對“指示病 毒”的幹擾等方法加以識別。近年來,許多新的動物病毒,就是通過組織培養方法而被發現。 生產病毒抗原以及製造病毒疫苗,則更大量地應用著組織培養。組織培養的方法有三種。
1．組織(塊)培養這就是原來意義上的所謂組織培養。將動物組織切成小 塊在固定或懸浮狀態下培養。組織塊培養是最早的組織培養方法。
2．器官培養 取器官薄片(例如一段胎兒氣管或一小塊鼻粘膜)進行培養,使其基本保持原來的結 構和功能,例如正常的纖毛上皮運動。某些呼吸道病毒,就是應用器官培養才分離出來的。這 種培養還是研究器官生理機能以及某些病毒感染機理的良好工具。
3.細胞培養應用胰酶等分散劑將動物組織消化成單個細胞懸液,適當洗滌以後,加入營養液,通常 即可使其貼附於玻璃瓶壁上, 並生長增殖。這樣的細胞培養物稱作〖ZZ4〗原代細胞。將已 長成單層的原代細胞從玻璃瓶壁上消化下來後再作培養,就是〖ZZ4〗繼代細胞。原代細胞和 繼代細胞一般地還保持原來細胞主要特性,例如繼續保持正常體細胞二倍體組型的染色體等 。經過嚴格檢查,染色體的數目和形態正常,並且沒有汙染的繼代細胞,特稱〖ZZ6〗二倍體細 胞株。繼代細胞(包括二倍體細胞株)一般可在體外傳幾代、幾十代至一百代左右,此後不可 避免地逐漸衰老死亡。由於遺傳突變或者在理化學物質和致瘤病毒的作用下,組織培養細 胞中有時出現惡性變細胞,也就是癌變細胞。這種癌變細胞具有很高的生長和增殖勢能,而且 幾乎可以無限地傳代,故稱〖ZZ5〗傳代細胞係。傳代細胞係的染色體已經發生改變,不再保 持原來細胞的正規的二倍體組型,故又稱為異倍體細胞。由人體和動物體取得腫瘤組織進行 培養,比較容易獲得傳代細胞係。為使二倍體細胞株不致因定期傳代而不斷增加代數,同時 也是為了避免發生變異,通常將其保存於-196℃的液體氮中,以甘油或二甲基亞碸作為保存劑 。這樣保存的細胞株,可以隨時取用, 甚為方便。但是必須指出,即使在已經鑒定並已廣泛 應用的細胞係(株)中也常可能發生病毒汙染,例如作者等在進口的IB〖ＤＫ〗RS〖DK〗2 係豬 腎細胞中就曾發現有一種RNA病毒的汙染。
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