布氏杆菌的平板凝集與試管凝集

 

（一）取潔淨玻片一塊，用玻璃鉛筆劃成五行小格，並標明待檢血清的號碼。

（三）按表8-1滴加待檢血清、抗原（將牛、羊、豬三型布氏杆菌懸浮於甘油濃鹽水中，加入煌綠及結晶紫製成）和生理鹽水（檢查綿羊、山羊血清時，用12％濃鹽水）。血清用前需放室溫，使其溫度達20℃左右。

 

表8-1  布氏杆菌的平板凝集反應

 

（三）用火柴棒自血清量最少格起,依次往前攪拌，使血清與抗原混勻，每份血清用一根火柴棒。

（四）混合完畢後，將玻片置於凝集反應箱上均勻加溫，或放於離火焰稍高處，微微加溫至30℃左右，3～5分鍾內記錄反應結果。

（五）按下列標準記錄反應強度

++++：出現大的凝集塊、液體完全透明。

+++：有明顯凝集塊、液體幾乎完全透明，即75%凝集。

++：有可見凝集片，液體不甚透明，即50％凝集。

+：液體混濁，有小的顆粒狀物，即25％凝集。

－：液體均勻混濁，無凝集物。

牛、馬和駱駝的血清在0.02ml處或以上凝集，而綿羊、山羊和豬的血清在0.04ml處或以上凝集，判為陽性反應；牛、馬和駱駝的血清在0.04ml處凝集，綿羊、山羊和豬的血清在0.08ml處凝集時判為可疑反應。

大規模檢疫時，允許隻用兩個血清量作試驗，牛、馬、駱駝用0.04和0.02ml，豬、山羊和綿羊、狗用0.08和0.04ml。如用兩個血清量作試驗，任何一個血清量出現凝集時，均需用四個血清量重檢。

（六）每次試驗須用標準陽性血清和陰性血清作對照。

 

 

（一）每份血清用4支試管（1×8cm），另取對照管3支。如待檢血清多時，隻設一份對照組。

（二）按表8-2，用0.5％石炭酸生理鹽水，將被檢血清稀釋成四個稀釋度。第五管中不加血清，設抗原對照。第六管中加1：25稀釋的布氏杆菌陽性血清0.5毫升作陽性對照。第七管中加1：25稀釋的布氏杆菌陰性血清0.5毫升作陰性對照。

（三）各管中加入用0.5％石炭酸生理鹽水稀釋20倍的布氏杆菌抗原0.5ml（每ml含菌8億）。

（四）各管加抗原後，將各管充分混勻，放37℃溫箱中感作4～10小時，取出後放室溫18～24小時，然後觀察並記錄結果。

（五）檢查豬、羊、狗時血清稀釋度為1:25，1:50，1:100，1:200；綿羊、山羊血清用10％濃鹽水稀釋。牛、馬和駝駱血清稀釋度為1:50，1:100，1:200，1:400，大規模檢疫可隻用兩個稀釋度，即狗、豬、羊為1:25，1:50；牛、馬、駱駝為1:50和1:100。

判定結果時用“十”表示反應強度：

++++：液體完全透明，菌體完全被凝集呈傘狀沉於管底，振蕩時，沉澱物呈片狀、塊狀或顆粒狀（即100％的菌體被凝集）。

+++：液體略混濁，菌體大部分被凝集於管底，振蕩時呈片狀或顆粒狀（75％菌體被凝集）。

++：液體不透明，管底有明顯凝集片，振蕩時有塊狀或小片絮狀物（50％菌體被凝集）。

+： 液體不透明，僅管底有少許凝集，其餘無顯著的凝集塊（25％菌體被凝集）。

－：液體混濁，管底無凝集，菌體不被凝集，但由於菌體自然下沉，在管底中央可見圓點狀沉澱，振蕩後立即散開呈均勻混濁。

（六）當每份待檢血清僅用2個稀釋度進行試驗時，無論任何一個稀釋度發生凝集現象，該血清都應該用四個稀釋度重檢。

（七）判定血清凝集價：出現“++”以上凝集現象的最高血清稀釋度為凝集價。牛、馬和駱駝血清凝集價1:100以上為陽性，1:50為可疑。豬、綿羊、山羊和狗的血清凝集價為1:50以上為陽性，1:25可疑。