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丁酸梭菌活菌製劑對腸道菌群影響的研究



錄入時間:2010-11-22 10:01:38 來源:維普資訊

     摘要 通過動物實驗和人體試食試驗,對丁酸梭菌活菌製劑一泰平片對腸道菌群的影響進行了研究。結果表明:受試對象腸道內的雙歧杆菌的數量增加,差異有極顯著性(p≤0.01),乳杆菌的數量增加,差異有顯著性(p≤0.05)。說明丁酸梭菌活菌製劑一泰平片具有一定的增殖腸道內有益菌和抑製有害菌的作用。
   關鍵詞:丁酸梭菌 腸道菌群
  丁酸梭菌(Clostridium butyricum)1933年由日本的宮入近治博士首先發現並報告的。其活菌製劑作為整腸劑在日本使用已有50年。我們對丁酸梭菌活菌製劑一泰平片對小鼠及人的腸道菌群的影響進行了實驗研究。
  1 材料與方法
  1.1 樣品 由深圳醫藥保健品進出口有限公司金華分公司提供的泰平片,經測定每片含丁酸梭菌活菌數為0.4×105CFUg
  1.2 實驗動物 由中國藥品生物製品檢定所實驗動物中心提供的健康成年雄性BALBc小鼠40(批準號:京動管製字1994081),體重18g22g
  1.3 受試人群 1個月內未患過胃腸疾病、未服用過抗生素類藥物、未服用過微生態製劑;血液、尿、便常規檢查及肝功能檢查,心率、血壓、心電圖、B(肝、膽、脾、腎)檢查,指標全部正常的30名誌願者,年齡25歲~60歲,男女各半。
  1.4 實驗方法
  1.4.1 樣品中丁酸梭菌活菌計數 無菌稱取25g樣品,加入225ml無菌生理鹽水中混勻,10倍稀釋。選擇合適的稀釋度,接種於TPY培養基。37℃48h78h,厭氧培養,計數丁酸梭菌。
  1.4.2 腸道菌群檢驗方法 雙歧杆菌:BBL培養基,37℃48h72h厭氧培養;乳杆菌:LBs培養基,37℃48h培養;腸杆菌:EMB培養基,37℃24h培養;腸球菌:疊氮鈉-結晶紫-七葉苷培養基,37℃24h培養;擬杆菌:Bd培養基,37℃48h厭氧培養;產氣莢膜梭菌:TSC培養基,37℃24h厭氧培養;丁酸梭菌:TPY培養基,37℃48h厭氧培養。樣品稀釋液:自製。
  1.4.3 動物試驗 泰平片人體推薦量為每人每日3片,即每人0.9g60kg·b.w,相當於0.015g/kg·b.w,小鼠等效劑量為人體推薦量的10倍,即每日0.15kg·b.w(中劑量),上、下各設一個劑量組:0.45gkg·b.w(高劑量)0.075g/kg·b.w(低劑量)。選用40隻雄性小鼠隨機分成4組,每組10隻,其中1組為正常對照組,對滅菌稀釋液灌胃,灌胃量按0.2ml10g·b.w計算,其餘3組以泰平片混懸液灌胃,每日1次,連續7天,於給受試物最後一次24h後,無菌采取小鼠糞便0.1g0.4g,置已稱重的帶玻璃珠的幹燥滅菌小試管中,再稱重,計算出小鼠糞便重量,並加滅菌稀釋液,稀釋10倍,振蕩1分鍾,再依次10倍係列稀釋,選擇合適的稀釋度,分別接種在各選擇性培養基上。
  1.4.4 人體試食試驗 實驗采用自身對照。試食受試物前,收集受試者新鮮糞便於便盒中,立即送檢。定量稱取標本,10倍稀釋並勻漿後,分別接種至各選擇性培養基,檢驗腸道菌群。受試者每日服用泰平片3(每片重0.3g,相當於每日服用丁酸梭菌1.2×105CFU),連續10d。於給受試物最後一次24h後,再收集受試者新鮮糞便,檢驗腸道菌群。
  2 結 果
  2.1 泰平片中丁酸梭菌活菌計數結果見表1
1 泰平片中丁酸梭菌活菌計數(接種量為0.1ml)

稀釋度

平板1

平板2

平均數

結果 (CFU/g)

10-3

14

10

12

1.2×105

10-4

1

2

1.5

1.5×105

   由表1可知,泰平片含丁酸梭菌活菌數為1.2×105CFU/g
  2.2 泰平片對BALBc小鼠體重的影響見表2。表2 試驗前後各組小鼠的體重及增長值

組別

動物數
  ()

試驗前

試驗後

增長值
  (g)

體重(g)

體重(g)

陰性對照組

10

17.74±0.42

21.63±0.38

3.89±0.70

低劑量組

10

17.96±0.28

21.65±0.55

3.69±0.49

中劑量組

10

17.91±0.33

21.80±0.89

3.89±0.86

高劑量組

10

18.05±0.40

21.77±0.61

3.72±0.72

   由表2可知,經統計學處理,小鼠的初始體重在低、中、高劑量組和對照組間比較,差異無顯著性(p≥0.05)。經口給予小鼠不同劑量的受試物7天後,小鼠的體重增長值在低、中、高劑量組和對照組間比較,差異無顯著性(p≥0.05),即泰平片對小鼠的體重增長無影響。
  2.3 泰平片對BALBc小鼠腸道菌群調節的作用結果見表3。 表3 泰平片對小鼠腸道菌群的影響(logcfu,x±SD,n=10)

細菌

正常對照組

低劑量組

中劑量組

高劑量組

灌服前

灌服後

灌服前

灌服後

灌服前

灌服後

灌服前

灌服後

腸杆菌

3.58±1.54

2.80±1.24

2.84±1.28

2.24±0.73

4.35±1.62

3.28±1.50

3.56±1.56

2.58±1.17

腸球菌

4.94±0.74

4.90±0.33

5.04±0.58

5.51±0.74

5.24±1.25

5.59±1.26

4.91±0.48

5.80±1.25**

雙歧杆菌

8.47±0.51

8.78±0.33

8.85±0.35

9.26±0.51

8.83±0.51

9.26±0.60

8.71±0.30

9.42±0.50**△△

乳杆菌

7.39±1.04

8.25±0.65

6.87±0.79

8.55±0.73**

7.70±1.18

8.93±0.34**△△

7.60±1.06

8.90±0.44**△

   *與灌服受試物前比較(自身對照) p≤0.05 與正常對照組(灌服稀釋液後)比較p≤0.05
  **與灌服受試物前比較(自身對照) p≤0.01 △△與正常對照組(灌服稀釋液後)比較p≤0.01  由表3可知,正常對照組灌服樣品稀釋液前後,小鼠腸道菌群數量無明顯變化,差異無顯著性(p≥0.05)。經口給予小鼠受試物後,小鼠腸道內的腸杆菌、雙歧杆菌、乳杆菌數量發生改變。低劑量組與灌服受試物前比較,乳杆菌的數量明顯增加,差異有極顯著性(p≤0.01);中劑量組與灌服受試物前比較,乳杆菌的數量明顯增加,差異有極顯著性(p≤0.01),高劑量組與灌服受試物前比較,雙歧杆菌、乳杆菌、腸球菌的數量明顯增加,差異有極顯著性(p≤0.01)
  低劑量組與正常對照組比較,雙歧杆菌的數量明顯增加,差異有顯著性(p≤0.05);中劑量組與正常對照組比較,雙歧杆菌的數量明顯增加,差異有顯著性(p≤0.05),乳杆菌的數量明顯增加,差異有極顯著性(p≤0.01);高劑量組與正常對照組比較,雙歧杆菌的數量明顯增加,差異有極顯著性(p≤0.01),乳杆菌的數量明顯增加,差異有顯著性(p≤0.01)
  2.4 泰平片對人體腸道菌群調節的作用結果見表4
4 泰平片對人體腸道菌群的影響(logcfu,x±SDn=30)

 

腸杆菌

腸球菌

擬杆菌

產氣莢膜梭菌

雙歧杆菌

乳杆菌

丁酸梭菌

服用前

6.75±1.13

5.35±1.13

8.25±1.64

1.94±1.19

8.21±0.96

6.97±0.98

3

服用後

7.00±0.92

5.56±1.78

9.78±0.58**

1.96±1.25

9.75±0.47**

8.45±0.68**

4.97±0.38

   *服用受試物後與服用受試物前比較 p≤0.05**服用受試物後與服用受試物前比較 p≤0.01  由表4可知,受試人群服用泰平片,腸球菌、腸杆菌、產氣莢膜梭菌的數量差異無顯著性(p≥0.05),雙歧杆菌、乳杆菌、擬杆菌的數量明顯增加,差異有極顯著性(p≤0.01)。服用前,取糞便標本10-2稀釋液0.1mL接種於TPY培養基,均未檢出丁酸梭菌,服用後,全部糞便標本均檢出丁酸梭菌。說明受試人群腸道內菌群發生了有益的變化。
  2.4 受試者自覺症狀觀察 服用泰平片後,部分受試者有排氣增多的現象,部分受試者的排便狀況有所改善,未見有不良反應。
  3 討 論
  丁酸梭菌是革蘭陽性厭氧芽孢菌,在人體腸道內是非常住菌,其芽孢對外界不利因素的抵抗力較強,由丁酸梭菌芽孢製成的微生態製劑耐貯存。日本對丁酸梭菌的生物學特性、生理功能做過大量的研究。將其作為微生態調節劑使用已有50年。泰平片是含有丁酸梭菌活菌的微生態製劑,給小鼠灌服後,腸道內雙歧杆菌和乳杆菌的數量明顯增加。同樣在人體試食試驗中,每日服用3片泰平片後,腸道菌群發生了有益的變化:糞便中的有益菌雙歧杆菌和乳杆菌的數量明顯增加,腸球菌、腸杆菌以及有害菌產氣莢膜梭菌的數量無明顯變化。

 

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