摘要: 目的 查清直飲水中費氏耶耳森氏菌對直欽水質量的影響。方法 采用細菌分離、微生物生化係統鑒定。結果 從直飲水中檢出費氏耶耳森氏菌。結論 加強設備的維護,確保各項工藝的正常運行,為社會提供優質的放心產品。
關鍵詞: 直飲水;費氏耶耳森氏菌;產品質量
2007年8月,對某直飲水廠進行常規衛生細菌檢測,發現菌落總數1 CFU/mL,大腸菌群0MPN/100 mL,屬正常範圍。肉湯增菌培養48 h無菌生長,但72 h肉湯變濁,檢出費氏耶耳森氏菌。
1 材料和方法[1]1·1 材料1·1·1 營養肉湯、SS瓊脂、麥康凱瓊脂、革蘭氏染色液、腸杆菌科細菌生代寫論文化編碼鑒定管、三糖鐵(均由浙江、湖南行政主管部門核發生產許可證的企業生產,在有效期內使用)。1·1·2 克氏雙糖鐵按GB 4789·28—2003[1]配製。1·2 方法1·2·1 分離培養:本菌生長溫度為30~37℃,但在22~29℃才能使本菌的某些特性出現。4℃時能保存和繁殖。本菌傳代時間長,最短亦需40min左右。在SS或麥康凱瓊脂上於25℃經24 h培養,菌落細小,至48 h直徑才增大成0·5~3·0mm。菌落圓整、光滑、濕潤、扁平或稍隆起,透明或半透明;在麥康凱瓊脂上菌落淡黃色,如若微帶紅色,則菌落中心的紅色常稍深。本菌在肉湯中生長呈均勻混濁,一般不形成菌膜。1·2·2 細菌鑒定:用杭州天和微生物試劑有限公司腸杆菌科細菌生化編碼鑒定管進行鑒定。
2 結果2·1 生物學特征本菌為革蘭氏陰性杆菌或球杆菌,大小為1~3·5μm×0·5~1·3μm,多單個散在,有時排列成短鏈或成堆。本菌不形成芽胞,無莢膜,有周鞭毛;但其鞭毛在30℃以下培養條件形成,溫度較高時即喪失,因此表現為30℃以下有動力,而35℃以上則無動力。2·2 生化鑒定特征2·2·1 檢查經1天培養的麥康凱平板,排除紅色或粘液狀菌落,挑取直徑1~2 mm偏平、無色或淡粉紅色,具有紅色中心整個邊緣明顯無色的小菌落。用接種針將所選菌落穿刺接種於賴氨酸精氨酸鐵瓊脂(LAIA)管、尿素瓊脂管、膽汁七葉甙管,室溫培養48 h。在LAIA中的培養物會產生堿性斜麵,酸性底層,不產生氣體和H2S(KA--)的反應,被認為是尿素酶陽性的可疑耶氏菌。將LAIA斜麵上的培養物劃線接種於厭氧卵黃瓊脂(AEY),置室溫培養。使用AEY上的生長物進行純度檢查、脂肪酶反應(2~5 d)、氧化酶試驗、革蘭氏染色和生化試驗的接種。將AEY上的菌落接種於生化試驗培養基,置室溫培養3 d。2·2·2 刮取一滿環(直徑3 mm)符合SN 0174—1992[2]的典型或可疑耶氏菌特性的改良克氏雙糖鐵瓊脂斜麵培養物,接種於裝有1 mL Rustigian氏尿素培養基(改良法)的直徑10 mm長為100 mm(3)試管中,手振搖5~6 s後於25℃培養,每隔30 min觀察1次,培養觀察至4 h。2·2·3 將尿素酶試驗陽性的改良克氏雙糖鐵瓊脂斜麵培養物按SN 0174—1992所列生化項目(尿素酶試驗除外)進行生化試驗,25℃培養,氨基酸脫羧酶試驗培養24~30 h,其他生化試驗陰性結果的應培養觀察4 d。2·2·4 改良的克氏雙糖鐵瓊脂培養結果按表1要求,初步判斷為非小腸結腸炎耶爾森氏菌。表1 改良克氏雙糖鐵瓊脂培養結果初步判斷方法初判結果斜麵底層產氣硫化氫可疑小腸結腸炎耶爾森氏菌A A - -非小腸結腸炎耶爾森氏菌A A + + 注:K:產堿,A:產酸;+陽性反應;-陰性反應;(+)偶見少量小氣2·3 經進一步生化鑒定,比對SN 0174—1992[2]關於耶爾森氏菌屬近緣菌的鑒別規定,最後判定為費氏耶爾森氏菌。
3 討論3·1 耶爾森氏菌為兼性厭氧菌,生長溫度為-1~48℃,能在反複冷凍、緩化下存活。由於該菌可在4℃下進行冷增菌,因此保存在4~5℃冰箱中的食品具有被汙染的危險。該菌要求較高的水活度,最低水活度為0·95,pH接近中性,較低的耐鹽性。對加熱、消毒劑敏感。控製耶爾森氏菌的關鍵因素包括適當的蒸煮或巴氏滅菌,適宜的食品處理以防止二次汙染。進行水處理、合理使用消毒劑等控製措施。在該廠正常生產的情況下直飲水中檢出耶耳森氏菌屬,說明該廠水源也被本菌汙染,生產中的消毒滅菌對該菌隻起到損傷作用沒有完全殺死,本菌屬在水中仍然存在,並不斷複蘇、繁殖,在1個月的保質期裏容易再次汙染水源。3·2 耶爾森氏菌屬分布很廣,可存在於生的蔬菜、乳和乳製品、肉類、豆製品、沙拉、牡蠣、蛤和蝦中。也存在於環境中,如湖泊、河流、土壤和植被等。已從家畜、狗、貓、山羊、灰鼠、水貂和靈長類動物的糞便中分離出該菌。在港灣周圍,許多鳥類包括水禽和海鷗可能是帶菌者。耶耳森氏菌屬有許多菌種是致病菌。耶爾森氏菌作為一種食源性疾病的有關特性了解較多,其在世界範圍內已爆發多起,食品和飲水受到汙染往往是爆發胃腸炎的重要原因。本菌雖不致病,但仍然值得高度關注。
參考文獻:
[ 1 ] GB 4789.28—2003,食品衛生微生物學檢驗染色液、培養基和試劑[S].
[ 2 ] SN 0174—1992,出口食品小腸結腸炎耶爾森氏菌檢驗方法[S].
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