各種接種技術和細菌生長狀況觀察
錄入時間:2010-11-16 10:06:51
來源：青島betway必威西汉姆联
1. 學會正確使用微生物學實驗室中常用的接種工具，掌握各種接種技術。
2. 掌握無菌操作技術和獲得微生物純培養物的方法。
3. 學會判斷細菌在不同培養基上的生長狀況。
一、常用接種工具
（一）接種環
接種環是用金屬絲做成的。使用前後均應在火焰上徹底灼燒滅菌，滅菌時右手持接種環（或接種針）之木柄，將鉑絲直立於火焰中，漸漸下移使鉑絲燒紅，並將鉑絲和木柄之間的金屬捧也通過火焰數次。取菌時，必須待接種環（針）冷卻後方可使用。
（二）接種針
滅菌處理基本上同接種環。
（三）吸管
微生物學實驗一般使用刻度到底的吸管，須進行無菌操作時，事先塞少許棉花於吸管上端管口內，然後把吸管置於金屬筒中或用紙條纏包起來，幹熱滅菌後方可使用。
（四）微量移液器
可調微量移液器外形如圖實驗-7所示，主要部件有按鈕、彈簧、活塞和可裝卸的滴頭（tip）。按動按鈕，使彈簧上下活動，可在10～1000μl之間定量吸放液體。滴頭可一次性使用，方便省事。
二、各種培養基的接種方法
培養物往新的培養基上移植，叫做接種。根據目的不同可分別采用接種環、接種針、移液管等進行斜麵接種、液體接種、半固體穿刺接種和瓊脂平板劃線分離等。
“無菌”是保證微生物實驗室工作成功的前提條件，要做到這一點就得使用無菌的材料、器皿和采用無菌操作技術。無菌操作技術主要是防止外界環境微生物汙染實驗材料、破壞實驗微生物的純培養狀態，同時也要防止實驗材料汙染環境或感染人體。因而要求：① 工作環境需用消毒液處理； ② 接種工具必須嚴格無菌。
1．實驗材料
（1）菌種
金黃色葡萄球菌斜麵培養物，大腸埃希菌斜麵培養物和液體培養物，枯草杆菌斜麵培養物，藤黃八疊球菌斜麵培養物，鏈球菌培養物，混合的細菌菌種（金黃色葡萄球菌與大腸埃希菌）。
（2）接種工具
接種環，接種針，無菌吸管，酒精燈。
（3）培養基及其它
瓊脂斜麵培養基，試管肉湯培養基，半固體培養基，瓊脂平板培養基，瓊脂高層培養基，無菌平皿等。
2．實驗方法
（1）斜麵培養基接種法
a． 左手持菌種管與培養基管，斜麵皆向上，菌種管在外側，右手如拿毛筆的姿勢持接種環，將鉑絲與欲進入試管的柄部通過火焰滅菌。
b． 右手的小指與掌心夾下培養基管棉塞，第四指與小指夾下菌種管棉塞，管口通過火焰。
c． 接種環伸入菌種管，沾取少許菌種。
d． 接種環伸入培養基管，在斜麵上蜿蜒劃線。注意沾有菌種的接種環不可碰管口與其它地方。
e． 管口再通過火焰，並將棉塞塞於原來的試管。
f． 接種環再滅菌。
（2）液體培養基接種法
基本上與斜麵培養基接種法相同，不同之處是，將挑取的菌種移種至液體培養基管中時，斜持試管，將菌塗於液麵處管壁上，試管直立以後菌種即在液體內。
用接種環分別挑取金黃色葡萄球菌斜麵培養物、枯草杆菌斜麵培養物、大腸埃希菌培養物，接種於肉湯培養基中，每菌接種1支。將已經接種好試驗菌的各管置於37℃恒溫箱培養24~48h。觀察上述各菌在液體培養基中的生長狀況。
（3）半固體培養基接種法
半固體培養基接種時應用接種針，接種針使用方法基本同接種環。接種時，將沾取菌種的接種針從半固體培養基表麵向下穿刺，但不觸及管底，接種針循原路抽出。此稱為“穿刺接種法。
分別接種金黃色葡萄球菌、枯草杆菌至半固體培養基中，放入37℃恒溫箱中培養24h後觀察它們的生長狀況，判斷它們是否具有動力。
（4）瓊脂平板劃線分離法
平板劃線有多種方法，其目的都是要將細菌分開，培養後可觀察單個菌落的特征。若挑取單個菌落移種至另外的培養基中，培養後即得純培養物。現介紹常用的平行劃線法及分區劃線法。
（1）平行劃線法
將接種環滅菌後，從菌種管沾取少許菌種，塗於平板培養基表麵一端的邊緣處，再將接種環滅菌，以殺死過多的細菌。從塗有細菌處開始做往返平行劃線，若從液體培養物取菌或從斜麵培養物取少量菌，估計分離出單個菌落時，取菌後可直接從平板一端向下劃平行線，可不必再將接種環滅菌。
分別取大腸埃希菌、枯草杆菌、金黃色葡萄球菌、藤黃八疊球菌的少許菌苔，在不同的無菌平板上通過分區劃線或平行劃線進行劃線分離。劃線後的平板在37℃恒溫箱中倒置培養24~48h。取出平板，從以下幾個方麵來觀察不同細菌的菌落：
大小：以毫米計。
形狀：圓形、不規則形、放射狀等。
表麵：光滑、粗糙、圓環狀、乳突狀等。
邊緣：整齊、波形、鋸齒狀等。
色素：有無色素、顏色，是否可溶（可溶色素使培養基著色）等。
透明度：透明、半透明、不透明。
（2）分區劃線法
如圖實驗-11所示，用接種環將所取菌種先劃線於a處。將接種環滅菌，從a處將菌劃出至b處。接種環再次滅菌後，從b處劃出至c處，依次類推，以達到培養後能獲得單個菌落的目的。
（5）傾注平板法
本法常用於細菌總數、細菌對藥物的敏感度試驗以及藥物的含量測定等。傾注平板的常用的操作方法有兩種：
a． 液混入培養基法
用無菌吸管吸取定量菌液，加入已熔化並冷卻至約50℃的瓊脂培養基中，迅速混勻，倒入無菌平皿，使均勻布滿皿底。平置勿動，凝固後即成含菌平板。此法細菌分布均勻，藥物的抑菌試驗（藥敏試驗）多用此法製備含菌平板。
b．菌液先加入平皿法
以無菌吸管吸取定量菌液或其它含菌樣品，加入無菌平皿中，再將熔化並冷至約50℃的無菌瓊脂培養基傾入該平皿中，立即將平皿輕輕地作旋轉晃動，以使菌液與培養基混合均勻，平置待凝固。計算藥品、食品等樣品中細菌總數時常用此法。因為是將定量樣品直接加入平皿中，所以菌數較準確。
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