必須按《中國藥典》抗生素微生物檢定法中的三劑量法要求對工作標準品進行效價複核實驗。每次實驗均應稱取2份國家標準品和2份需測工作標準品進行平行試驗，每組實驗應不少於9個平皿，實驗結果的可信限率應不得大於5%，結果取平均值。該實驗需反複多次地在不同操作人員間進行，以積累充分多的數據滿足統計需要。最後，將所得結果進行統計合並計算（不是求平均值，具體方法可參見《中國藥典》生物檢定統計法中的實驗結果的合並計算），才能得出被測工作標準品較為客觀的效價。各實驗室自行標定的工作標準品隻能在本室內使用。
複核試驗應由具有一定實驗操作經驗的人員進行。根據所要分析的抗生素類型，來確定采用管碟法還是采用比濁分析法。本文以管碟法為例，介紹工作標準品的複核和評價方法。
按《中國藥典》（2005年版 ）要求，用標準貯備液稀釋製備3種不同濃度的標準液，如80%、100%和125%。這3種濃度的對數值間是等距離的，因此在檢測結果的統計學計算中可采用一常數表示。國家標準品的濃度分別用U1、U2和U3表示低、中、高3種濃度。
本法采用隨機編碼方式，在平皿內的瓊脂培養基表麵擺放6個不鏽鋼小管，向每個管內加入不同濃度的溶液。每個工作標準品的稱量樣品要求做12個平皿。在規定條件下培養，培養時間結束後，目測檢查每個平皿，看是否抑菌區不正常或不含抑菌區的平皿，並剔除不正常的平皿，從目測結果良好的平皿中隨機選取其中的9個，用適當的儀器（如ZY-300W多功能微生物 自動測量分析儀）準確量出每個抑菌圈的直徑。
無論是在進行抗生素效價複核還是平時進行效價的正式測定操作之前，都應先進行菌液濃度的預測試驗。其目的是選擇適宜的菌液濃度，使被測抗生素標準品溶液所致的抑菌直徑在《中國藥典》（2005年版 ）規定範圍內，2.2法標準 品溶液高濃度所致的抑菌圈直徑在18—24mm；3.3法標準品溶液中心濃度所致的抑菌圈直徑在15—18mm。
其操作方法是：①按無菌操作往雙碟內加入加熱融化後的底層培養基20ml，用陶瓦蓋覆蓋，待其凝固；②取加熱融化後的菌層培養基20ml，待其降至規定溫度將試驗菌加入培養基內，搖勻，吸取5ml均勻攤布在底層培養基上，用陶瓦蓋覆蓋，靜置約10—20min；③在製備好的雙碟上等距離放置小鋼管2—3個，在小鋼管內滴加欲測抗生素的標準溶液；④滴加完畢，用陶瓦覆蓋，小心移置培養箱內，按規定的溫度和時間進行培養；⑤取出培養好的雙碟，用卡尺測量抑菌圈直徑。若所試抑菌圈直徑超過規定範圍，可調整加菌量或調整抗生素標準品溶液的濃度，重新測試 。
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