潔淨區沉降菌監測是通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子於培養基平皿，經若幹時間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進行計數，以平板培養皿中的菌落數來判定潔淨環境內的活微生物數，並以此來評定潔淨室（區）的潔淨度。其主要適用於食品、藥品、化妝品、環境監測等領域，有助於保障產品質量和公共衛生安全。有關無菌環境的監控和檢測可參考實驗室無菌環境怎樣監控和檢測？在實際操作中，潔淨度等級不同的區域，沉降菌監測點的設置和評估標準均有差異，本文主要介紹實際操作時需注意的幾個要點。
1、培養用品
培養皿，一般采用直徑Φ90mm×15mm規格的培養皿；培養基，大豆酪蛋白瓊脂培養基（TSA）或沙氏培養基（SDA）或用戶認可並經驗證了的培養基；恒溫培養箱，必須定期對恒溫培養箱進行校驗。
2、測試條件
在測試之前，要對潔淨室（區）相關參數進行預先測試，這類測試將會提供測試沉降菌的環境條件。
a）溫度和相對濕度的測試。潔淨室（區）的溫度和相對濕度應與其生產及工藝要求相適應（無特殊要求時，溫度在18℃~26℃，相對濕度在45%~65%為宜），同時應滿足測試儀器的使用範圍。
b）室內送風量或風速的測試，或壓差的測試。
c）高效過濾器的泄漏測試。
3、采樣點設置
（1）采樣點的數目
沉降菌測試的最少采樣點數目的確定有兩種方式可以選擇，一種是取潔淨室或潔淨區的麵積（A）的算術平方根，即NL=A
表1 最少采樣點數目
舉例說明：
一個100 m2的潔淨室，按照第一種方法計算，最少采樣點應為10個；按照第二種方法查表可得，100級潔淨區采樣點至少為40個，10000級潔淨區采樣點至少為10個，10萬和30萬級潔淨區采樣點至少為3個；若潔淨區有級別規定，盡量采用第二種方法進行采樣點數目的設置。
（2）采樣點的位置設置
a）采樣點一般在離地麵0.8m高度的水平麵上均勻布置。
b）采樣點多於5點時，也可以在離地麵0.8m~1.5m高度的區域內分層布置，但每層不少於5點。
c）潔淨室（區）采樣點布置宜力求均勻，避免采樣點在局部區域過於稀疏，可在關鍵設備或關鍵工作活動範圍處增加測點。
多點采樣的采樣點布置規則如圖1。
圖1 平麵采樣點布置圖
（3）最少培養皿數
在滿足最少采樣點數目的同時，還宜滿足最少培養皿數，見表2.
表2 最少培養皿數
|
潔淨度級別 |
最少培養皿數（φ90 mm） |
|
100 |
14 |
|
10000 |
2 |
|
100000 |
2 |
|
300000 |
2 |
4、測試步驟
（1）測試前培養皿表麵必須嚴格消毒。
（2）將已製備好的培養皿按采樣點布置圖逐個放置，然後從裏到外逐個打開培養皿蓋，使培養基表麵暴露在空氣中。
（3）靜態測試時，培養皿暴露時間為30min以上，動態測試時，培養皿暴露時間為不大於4h。
（4）全部采樣結束後，將培養皿倒置於恒溫培養箱中培養。
（5）采用大豆酪蛋白瓊脂培養基（TSA）配製的培養皿經采樣後，在30℃~35℃培養箱中培養，時間不少於2 d；采用沙氏培養基（SDA）配製的培養皿經采樣後，在20℃~25℃培養箱中培養，時間不少於5d。
（6）每批培養基應有對照試驗，檢驗培養基本身是否汙染。可每批選定3隻培養皿作對照培養。
5、結果計算
（1）用計數方法得出各個培養皿的菌落數。
（2）每個測點的沉降菌平均菌落數的計算，如下公式。
M1—1號培養皿菌落數；
M2—2號培養皿菌落數；
Mn—n號培養皿菌落數；
n一培養皿總數。
6、結果評定與糾正
每個測點的沉降菌平均菌落數必須低於所選定評定標準中的界限（如表3）。
表3 潔淨室（區）沉降菌技術要求
在靜態測試時，若某測點的沉降菌平均菌落數超過評定標準，則應重新采樣兩次，兩次測試結果均合格才能判為符合。
7、頻次設置
對於沉降菌的取樣頻次，如果出現下列情況應考慮修改，在評估以下情況後，也應確定其他項目的檢測頻次：
（1）連續超過糾偏限度和警戒限度；
（2）停工時間比預計延長；
（3）關鍵區域內發現有汙染存在；
（4）在生產期間，空氣淨化係統進行任何重大的維修；
（5）日常操作記錄反映出傾向性的數據；
（6）消毒規程的改變；
（7）引起生物汙染的事故等；
（8）當生產設備有重大維修或增加設備時；
（9）當潔淨室（區）結構或區域分布有重大變動時。
相關產品：
參考文獻：
GB/T 16292-2010 醫藥工業潔淨室（區）懸浮粒子的測試方法
GB/T 16294-2010 醫藥工業潔淨室（區）沉降菌的測試方法
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