一、試驗原理:
弧菌顯色培養基是青島betway必威西汉姆联生物公司改良的培養基,用於食品、海產品、病人糞便樣品和水產品中副溶血性弧菌的快速檢測。副溶血性弧菌顯藍綠色且菌落比較大,霍亂弧菌和創傷弧菌顯紫紅色,溶藻弧菌顯淡黃色或米黃色,其它細菌絕大部分被抑製。本培養基的特異性高,可以克服TCBS培養基引起的假陰性結果,是一種很理想的快速檢測培養基。
弧菌自身代謝產生的酶與相應顯色底物反應使菌落顯色,以區分目標菌與非目標菌。顯色底物是由產色因子和微生物部分可代謝物質組成,在特異性酶作用下,遊離出產色因子使弧菌菌落顯示相應的顏色。
二、培養基配方(g/L):
特殊營養物質 |
75.0 |
混合顯色劑 |
4.45 |
瓊脂 |
15.0 |
pH值8.6±0.1(25℃) |
三、試驗方法:
1. 稱取本品18.9g加入200mL蒸餾水,加熱溶解並不停攪拌,煮沸3-5次。冷卻至45℃-50℃時,傾入無菌平皿。注意:製備好的培養基表麵不能太幹燥。
2. 10倍梯度稀釋法製備目標菌菌懸液,吸取合適梯度的菌懸液塗布接種於待測培養基和參比培養基上。
3. 非目標菌(特異性)定性測試,接種環取一環質控菌株培養液劃線接種至待測平板上。
4. 放置於恒溫培養箱36℃±1℃需氧培養18h-24h,觀察試驗結果。
四、試驗結果判斷:
接種以下質控菌株,放置於36℃±1℃需氧培養18h-24h,試驗結果如圖1所示。
質控菌株 |
菌株編號 |
接種量(CFU) |
參比或計數培養基 |
方法 |
質控結果 |
其他特征 |
副溶血性弧菌 |
ATCC 17802 |
20-200 |
3%NaCl TSA |
定量 |
PR≥0.5 |
藍綠色,菌落比較大 |
溶藻弧菌 |
ATCC 17749 |
/ |
/ |
定性 |
/ |
淡黃色或米黃色 |
霍亂弧菌 |
非O1群 |
/ |
/ |
定性 |
/ |
紫紅色 |
創傷弧菌 |
ATCC 27562 |
/ |
/ |
定性 |
/ |
紫紅色 |
金黃色葡萄球菌 |
ATCC 25923 |
/ |
/ |
半定量 |
G≤1 |
/ |
大腸埃希氏菌 |
ATCC 25922 |
/ |
/ |
半定量 |
G≤1 |
/ |
圖1 弧菌顯色培養基(第二代)微生物質控結果
注:A:副溶血性弧菌;B:溶藻弧菌;C:霍亂弧菌;D:創傷弧菌;E:金黃色葡萄球菌;F:大腸埃希氏菌
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