R2A瓊脂培養基（中國藥典）

用途：用於純化水中菌落總數的測定，（EP、USP、Chp標準）

配方：

酵母浸出粉	0.5
蛋白腖	0.5
酪蛋白水解物	0.5
葡萄糖	0.5
可溶性澱粉	0.5
磷酸氫二鉀	0.3
無水硫酸鎂	0.024
丙酮酸鈉	0.3
瓊脂	15.0
pH值7.2 ± 0.2	25℃

用法：稱取本品18.18g,加熱溶解於1000ml純化水中,分裝三角瓶,121℃高壓滅菌15分鍾,備用。

注：培養基中有少量澱粉和硫酸鎂，滅菌後可能會有微量沉澱。

檢驗原理：酵母浸出粉、蛋白腖、酸蛋白水解物提供氮源、維生素、生長因子；葡萄糖、為可發酵糖類；可溶性澱粉可以吸收菌在複蘇過程產生的有害物質；丙酮酸鈉可增強細菌的複蘇。磷酸氫二鉀為酸堿緩衝劑；無水硫酸鎂提供二價陽離子；瓊脂為凝固劑。

不同藥典關於純化水的微生物檢測方法和質量標準

中國藥典

    【檢查】 微生物限度 取本品不少於 1ml，按薄膜過濾法處理後，采用 R2A 瓊脂培養基，30～35℃培養不少於 5 天，依法檢查（通則 1105），每1ml 供試品中需氧菌總數不得過 100cfu。

操作簡述：

    除葡萄糖、瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，調節 pH 值使加熱後在 25℃的 pH值為 7.2±0.2，加入瓊脂，加熱溶化後，再加入葡萄糖，搖勻，分裝，滅菌。 R2A 瓊脂培養基適用性檢查試驗 照通則 1105 中“計數培養基適用性檢查”的胰酪大豆腖瓊脂培養基的適用性檢查方法進行，試驗菌株為銅綠假單胞菌和枯草芽孢杆菌。應符合規定。

USP標準

    在美國藥典中，推薦使用0.45μm薄膜過濾法，並同時使用高營養培養基（平板計數瓊脂培養基（PCA））於30-35℃培養72小時以上，和低營養培養基（R2A瓊脂）於20-25℃培養96小時以上。檢測標準為：≤100cfu/ml 。

操作簡述：（可根據實際情況調整）

    量取10ml充分混勻的水樣，以無菌操作加入安裝好的薄膜過濾器內，過濾。並用 pH7.0的無菌氯化鈉-蛋白腖緩衝液衝洗濾膜，每張濾膜每次衝洗量為100ml,共衝洗1次。過濾後，取出濾膜，正麵朝上貼於瓊脂平板上。共製備 2張濾膜，一張濾膜貼於平板計數瓊脂培養基平板（高營養培養基）置30℃~35℃生化培養箱中倒置培養2~3天，計數。另一張濾膜貼於R2A瓊脂平板（低營養培奍基），置20℃~25℃生化培養箱倒置培養5~7天，計數。以培養基平板上菌落數生長較多者作為檢測結果， 按比例折算為1ml純化水中的微生物數量後報告。
EP標準

    在歐洲藥典中使用薄膜過濾法（0.45μm 孔徑濾膜），使用 R2A 瓊脂培養基在 30℃～35℃培養 5 天以上。 質量標準：≤100cfu/mL。

操作簡述：（可根據實際情況訓整）

    量取 10ml 充分混勻的水樣，以無菌操作加入 安裝好的薄膜過濾器內，過濾。並用 pH7.0 的無菌氯化鈉-蛋白腖緩衝液衝洗濾膜,每張濾膜 每次衝洗量為 100ml，共衝洗 1 次。過濾後，取出濾膜，正麵朝上貼於 R2A 瓊脂平板上, 置 30℃～35℃生化培養箱中倒置培養 5 天，計數。按比例折算為 1ml 純化水中的微生物數量後 報告。

R2A瓊脂微生物質控結果：

大腸埃希氏菌 白色菌落							金黃色葡萄球菌 白色菌落

銅綠假單胞菌 有綠色色素

R2A瓊脂培養基的原理及應用:/asphtml/refere9562.htm

R2A瓊脂培養基(中國藥典)微生物靈敏度試驗:

按標簽用法製備培養基，接種以下質控菌株，放置30-35℃需氧培養48-120小時。
注：回收率計算時，用R2A瓊脂做對照培養基。