細菌病暴發是造成羅非魚經濟損失的重要原因之一，而嗜水氣單胞菌作為主要的病原菌之一，其發病率及耐藥性也逐年增加。近年來，大量資料證明，嗜水氣單胞菌可引發人類的食物中毒、敗血症、腦膜炎、蜂窩組織炎及傷口感染，影響食物安全，是重要的“人-獸-魚”共患病病原菌。去年4月，在廣東廣州一養殖場患病尼羅羅非魚病灶處曾分離出一株細菌，經革蘭氏染色鏡檢、ATB生化鑒定以及16SrRNA基因序列分析，確定分離株為嗜水氣單胞菌，並經過了相關藥敏抗性試驗檢測，為該病害的預防提供參考。
材料與方法
病魚來源 發病羅非魚樣本采自廣州一羅非魚養殖場，體重250克~300克。
病原菌的分離與培養 現場取發病羅非魚，由羅非魚的表麵症狀可知，其眼部凹陷，鰓部充血嚴重；解剖發現腸道無食、紅腫、黏液增多，肝部有病變，有斑點，在實驗室無菌操作台上用75%酒精棉球對采樣魚體表進行消毒，無菌取樣器取病魚的肝、腦、腎、腸組織及眼部，劃線接種於血瓊脂平板和TSA平板。28℃培養18小時後，挑取形態一致的優勢菌落進行純化培養，純化後的細菌用於生化分子鑒定及藥敏檢測。
結果
細菌的分離培養及染色鏡檢 不同組織分離到的菌落形態基本一致。在TSA平板上28℃條件下培養24小時，呈圓形、邊緣整齊、中央隆起、表麵濕潤、光滑、顏色淺黃的菌落。在血平板上呈典型的β溶血環。經革蘭氏染色，在油鏡下均為革蘭氏陰性杆菌，兩端鈍圓，直或略彎，單個或成雙排列，無莢膜。
生理生化結果 對分離菌株與標準的嗜水氣單胞菌同時用生化分析儀進行鑒定。結果表明，病原菌的生理生化反應指征與嗜水氣單胞菌標準菌株的結果一致，所以分離到的菌株應為嗜水氣單胞菌。
分子鑒定 采用大腸杆菌、羅非魚無乳鏈球菌和嗜水氣單胞菌三個菌的PCR引物同時對病原菌進行擴增，並設陰性對照，結果，菌株經擴增得到大小為420bp左右的特異性條帶，與嗜水氣單胞菌的特異性條帶一致，此鑒定結果也與文獻報道結果基本一致。
藥敏試驗結果 對15種比較常規的抗生素進行抗性試驗（表2），菌株對菌必治、環丙沙星、氧氟沙星、四環素以及恩諾沙星表現極敏感，對頭孢氨苄、新黴素、氟苯尼考、阿莫西林、妥布黴素、卡那黴素和羅紅黴素較敏感，對鏈黴素、青黴素、新生黴素不敏感。
討論
由於發病魚的表觀主要臨床症狀之一為眼球突出，且有臨死前於水麵打轉或間歇性竄遊的表現，因此也懷疑為鏈球菌病，革蘭氏染色鏡檢也發現一種陽性球菌，經PCR鑒定為海豚鏈球菌。在致病性研究中也一起進行了攻毒試驗，結果10尾魚中僅有2尾死亡，說明該球菌的致病力比較弱，這說明嗜水氣單胞菌是導致此次尼羅羅非魚發病的主要致病菌，但臨床感染中這種混合感染的情況值得關注和防範。
嗜水氣單胞菌廣泛存在於水、土壤以及水生動物中，是條件性致病菌。本次網箱尼羅羅非魚的發病即是由於轉群引起，轉入網箱前魚體表現正常，無死魚，轉入網箱後開始發病，連續一周內，每天均有四五十尾魚死亡。細菌分離鑒定後進行藥敏試驗，結果發現該菌株對菌必治、環丙沙星、氧氟沙星、四環素以及恩諾沙星表現極敏感，對頭孢氨苄、新黴素、氟苯尼考、阿莫西林、妥布黴素、卡那黴素和羅紅黴素較敏感，對鏈黴素、青黴素、新生黴素不敏感。這一結果與以往的報道有較大差異，蔡完其等在發病羅非魚的溫和氣單胞菌的病原研究和藥敏試驗中發現，丁胺卡那黴素對分離到的嗜水氣單胞菌具有很好地抑菌效果，而對本研究中分離到的菌株卻不敏感；董忠典等的研究發現，分離到的4株菌對丁胺卡那、鏈黴素極為敏感，對頭孢噻吩不敏感，而本次分離到的菌株對頭孢噻吩敏感，對丁胺卡那、鏈黴素不敏感。這可能與不同地區的用藥情況有關，但隨著各種藥物耐藥程度的不斷升高，建議臨床以加強管理，預防發病為主，用藥時盡量采用輪換用藥，避免一種藥物長期應用，或是采用有好的抑菌效果的中藥製劑。
隨著人們對魚類健康養殖的需求日益增加，使用疫苗預防各種水產疾病的發生是目前研究的重點，然而疫苗菌株的選擇及合適的劑型是目前研究需要解決的重要問題，魚類免疫不同於其他動物，通過腹腔注射進行免疫會耗費大量的人力物力，很難應用於實際生產，因此開發浸泡和口服疫苗是適用水產動物的最佳途徑。本研究分離到一株具有強致病性的嗜水氣單胞菌，目前僅對其生化特性、藥物敏感性和致病力進行了初步探索，菌株的傳代毒力、半數致死量及免疫原性等仍需進一步研究，但就其應用前景來說，可以為嗜水氣單胞菌的疫苗開發奠定基礎，提供合適的候選菌株。
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