飼料在加工、儲運過程中極易受黴菌汙染，飼料一旦黴變，不僅其營養價值會降低，適口性差，而且黴菌毒素會直接危害動物和人類的健康，甚至導致死亡，因此黴菌及黴菌毒素汙染所造成的損失已引起人們的高度重視。黴菌不是一個分類學上的名稱，而是某些絲狀真菌的俗稱，指在基質上長成具有絨毛狀、棉絮狀或蜘蛛網狀的菌絲體的真菌，一般泛指毛黴、根黴、曲黴、青黴、鐮刀菌等屬真菌。近年來世界各國紛紛製訂黴菌及黴菌毒素的限量標準，同時加強對黴菌檢測技術的研究，並不斷完善該項技術。我國在GB13078-91中公布了對我國部分飼料原料中黴菌總數的允許量、限用量，檢測方法依照GB13092-91，但在實際檢驗工作中，發現了不少問題。飼料生態區係具有多樣性和複雜性的特點，我國飼料中黴菌汙染又比較普遍，因此對黴菌檢測方法的研究具有重要的現實意義。本文根據檢驗中出現的問題，結合國內外有關研究的最新進展，對黴菌檢測的接種方式、培養時間等問題作幾點探討。
接種方式常用的微生物接種方式主要有傾注法和塗布法兩種。目前國標方法中采用傾注法，然而有實驗和報道證實，黴菌計數采用塗布法更合適。對黴菌計數來說，塗布法有以下幾方麵優越於傾注法：①在操作上更容易：傾注法要求將培養基熔化之後涼至45℃再注入培養皿中，但實際上在稀釋菌液的同時，很難控製溫度。如果培養基溫度太高則可能使黴菌孢子受熱損傷甚至死亡，同時如果樣品已經稀釋而培養基溫度仍很高，則有可能使稀釋液保持時間太長。如果溫度太低時傾倒，培養基會凝固。如果在大批量進行檢驗時，則更難於掌握溫度。②塗布法培養所需的時間較短，培養出的黴菌菌落數較多，黴菌孢子、菌落形態特征發育完全，便於鑒定。這是因為絕大多數黴菌是好氧的，在培養基表麵生長快，發育好，而混在培養基中發育就受影響。③由於塗布法是先倒好培養基，後接種，因而可以知道培養基是否染上雜菌。因此，黴菌計數采用塗布法既準確又省時。
培養時間對飼料黴菌的檢測時間，國標中采用培養3天後開始觀察，應培養觀察1周。我們發現，正常培養條件下，許多樣品在培養3天後已經無法準確計數，尤其是含有生長特別快、菌絲很多的菌如毛黴、根黴、木黴等樣品和濕度較大的樣品時，則必須提早觀察記錄，在48小時以內計數，否則菌絲就會覆蓋整個平皿，無法準確計數。實驗發現，培養3天～4天的菌落數與5天～7天的基本相同，因此，飼料中黴菌計數，培養2天就應開始觀察，如果隻是計數，培養2天～4天已基本達到目的，但如果還要進一步分類鑒定，則需要培養更長的時間（7天～14天）。
培養基國標中黴菌檢測使用的是高鹽察氏培養基（CAO），這種培養基僅適合於高滲性黴菌生長，所以嚴格說來，在此培養基中生長的菌數並不是真正的黴菌總數。但由於飼料中產生毒素的真菌，主要是曲黴屬、青黴屬和鐮刀菌屬，其中許多菌種是適應高滲的，因此，選用高鹽察氏培養基還是具有一定代表性的。有時為了確切地反映樣品中真菌的全貌，還可同時選用低滲性培養基，如馬鈴薯葡萄糖培養基；為了分離某種類型或特定的產毒真菌，也可用選擇性培養基。
培養溫度國標中采用的溫度為25℃～28℃±1。大多數黴菌的最適生長溫度為25℃～30℃，但一些產曲黴毒素的菌株則需要更高的溫度，如黃曲黴最適生長溫度為35℃，構巢曲黴為33℃，煙曲黴為37℃，因此，培養溫度應根據實際情況做適當調整。
計數範圍黴菌菌落由孢子和菌絲組成，相當擴散，在直徑9厘米的平皿裏，菌落數稍多就相互交叉重疊，影響計數，但數量太少又會產生較大的誤差，因此選擇適當的稀釋度計數是保證結果準確的關鍵環節之一。在實驗中發現，國標中計數範圍中采用30個～100個顯然不太合適，大部分飼料樣品檢測中含50個～100個菌落已較難計數，因此，應盡量選擇每平皿10個～50個的稀釋度進行黴菌計數。而對含有菌絲很豐富、菌落特別擴散的毛黴、根黴、犁頭黴等菌株，則應在更少的範圍內計數（每平皿30個以內），以確保計數的準確性。黴菌檢測中應注重對汙染菌相的分析
黴菌種類很多，但能產生黴菌毒素的隻限於少數的產曲黴毒素，而產毒菌種也隻有少量菌株能產生具有危險性數量的黴菌毒素，因此僅對黴菌總數進行檢測並不能全麵反映其危害程度，重要的是要知道汙染菌的菌相，才能更好地判斷被汙染的飼料的安全程度。關於我國飼料中的菌相分析，這些年來已初步取得結果，我國飼料（糧）中常汙染的黴菌有黃曲黴、雜色曲黴、變異曲黴、米根黴、青霞等，其中尤以黃曲黴和雜色曲黴為常見。國外有些研究者設計出各類選擇性培養基，可以識別產毒的黴菌。如AFPA培養基（配方：酵母提取汁20克，蛋白腖10克，檸檬酸鐵銨0．5克，0．2％二氯硝基本胺1.0毫升，瓊脂15克，0.2％二氯硝基苯胺1.0毫升，pH值為5．6）可以用於分離黃曲黴毒素產生菌。產黃曲黴毒素的菌株黃曲黴和寄生曲黴在AFPA上30℃培養2天～3天就形成背麵有亮橙黃色的特征性菌落，非常容易識別。有人利用該培養基分離黃曲黴高汙染食品花生、玉米等，取得了滿意的結果。因此，針對不同樣品，有目的地設計出相應的選擇性培養基，以篩選汙染菌中的危險菌群，將是一個值得探索的方向。
總結培養時間：為避免飼料樣品中含有生長特別快、菌絲很多的菌，黴菌計數必須在48小時以內開始觀察，否則菌絲就會覆蓋整個平皿，無法準確計數；如果隻作黴菌計數，培養2天～4天已基本達到目的；如果要進一步分類鑒定，則需要培養更長的時間(7天～14天）。
接種方式：黴菌接種采用塗布法比傾注法更合適。
計數範圍：應盡量選擇每平皿10個～50個的稀釋度進行黴菌計數。而對菌絲很豐富、菌落特別擴散的菌株，則應在更少的範圍內計數（30個1平皿以內）。
培養溫度（25℃～28℃±1）已經可以滿足要求，特殊來源的飼料應根據實際情況做適當調整。
僅對黴菌總數進行檢測並不能全麵反映其危害程度，更重要的是要知道汙染菌的菌相，才能更好地判斷被汙染飼料的安全程度。
（來源：三農在線網）
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