一、試驗原理:
胰腖-亞硫酸鹽-環絲氨酸瓊脂培養基(TSC)用於產氣莢膜梭菌的平板計數。胰腖、大豆腖和酵母浸粉作為培養基中的基礎營養物質,提供細菌生長所需的碳氮源、維生素和其他的生長因子;的產生,產氣莢膜梭菌能利用焦亞硫酸鈉中的S產生硫化氫氣體,與檸檬酸鐵銨中的亞鐵離子反應生成黑色的硫化亞鐵物質;D-環絲氨酸能抑製革蘭氏陰性菌和其他非梭菌細菌的生長;瓊脂是培養基的凝固劑。
二、培養基配方(g/L):
胰腖 大豆腖 酵母浸粉 檸檬酸鐵銨 焦亞硫酸鈉 瓊脂 pH值7.6±0.2(25℃) |
15.0 5.0 5.0 1.0 1.0 15.0
|
三、試驗方法:
1)稱取本品47.0g,加熱溶解於1000mL蒸餾水中,分裝三角瓶,121℃高壓滅菌15分鍾,冷卻至50℃時,每250mL培養基加入過濾除菌的0.5% D-環絲氨酸溶液20mL,混勻,備用。
2)采用濾膜法,取50mL的水樣用孔徑為0.45μm的濾膜過濾,然後將濾膜移至TSC瓊脂培養基上,倒置於36℃±1℃厭氧培養24h,計數黑色菌落。
四、試驗結果判斷:
接種以下質控菌株,放置36±1℃需氧培養22-24小時。
質控菌株 |
菌株編號 |
接種量(CFU) |
方法 |
質控結果 |
其他特征 |
產氣莢膜梭菌 |
ATCC 13124 |
20-200 |
定量 |
PR≥0.7 |
黑色菌落 |
艱難梭菌 |
ATCC 43593 |
/ |
半定量 |
G≤1 |
/ |
產氣莢膜梭菌ATCC13124
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