一、試驗原理:
本培養基用於大腸杆菌的O157:H7的測定(SN/T0973-2000)。
胰蛋白腖提供碳源和氮源滿足細菌生長的需求;氯化鈉可維持均衡的滲透壓;乳糖是大腸菌群可發酵的糖類;磷酸二氫鉀和磷酸氫二鉀是緩衝劑;月桂基硫酸鈉可抑製非大腸菌群細菌的生長。大腸埃希氏菌含有的葡萄糖醛酸苷酶作用於4-甲基傘形酮-β- D葡萄糖醛酸苷(4-Methylumbellifery-β-D-Glucuronide簡稱MUG)的β糖醛酸苷鍵,使其水解,釋放的4-甲基傘形酮 在366nm紫外燈下產生藍白色熒光。97%的大腸埃希氏杆菌、10%的沙門氏菌以及少量的誌賀氏菌具有葡萄糖醛酸苷酶;而致病性大腸杆菌(包括O157:H7)不具有葡萄糖醛酸苷酶,因而不會產生熒光。
二、培養基配方(g/L):
胰蛋白腖 |
20.0 |
氯化鈉 |
5.0 |
乳糖 |
5.0 |
磷酸氫二鉀 |
2.75 |
磷酸二氫鉀 |
2.75 |
月桂基硫酸鈉 |
0.1 |
pH 6.8±0.2 25℃ |
三、操作步驟:
1、製備質控菌液。
2、把質控菌液加入試管中。
3、在36±1℃培養24小時,記錄實驗結果。
四、微生物試驗結果:
接種以下質控菌株,在36±1℃培養18-24小時:
質控菌株 |
菌株編號 |
接種量(CFU) |
生長情況 |
其他特征 |
大腸埃希氏菌 |
ATCC25922 |
>5000 |
+++ |
產氣,有熒光 |
大腸埃希氏菌0157 |
ATCC35150 |
>5000 |
+++ |
產氣,無熒光 |
傷寒沙門氏菌 |
ATCC14028 |
>5000 |
+++ |
不產氣,無熒光 |
金黃色葡萄球菌 |
ATCC25923 |
>5000 |
+++ |
抑製 |
圖1-2 月桂基硫酸鹽蛋白腖MUG培養基微生物質控結果
備注:A:正常情況下拍攝,B:366nm紫外燈下拍攝;
a:大腸埃希氏菌O157,b: 大腸埃希氏菌,c: 傷寒沙門氏菌,d:金黃色葡萄球菌,e:空白對照
五、方法的局限性
本培養基僅為細菌鑒定的一部分,需做其他補充試驗。
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