物理滅菌法
（一）加熱滅菌法
加熱可破壞微生物中酶、蛋白質和核酸，導致微生物死亡。加熱滅菌又分幹熱滅菌法和濕熱滅菌法。在同一溫度下，濕熱滅菌的效果比幹熱滅菌好。主要是因濕熱滅菌時，有水分存在，蛋白質容易變性。水分又易使微生物膜壁潤濕，濕熱的穿透力比幹熱大。
幹熱滅菌法 常用的有火焰滅菌法與幹熱空氣滅菌法兩種。
（二）紫外線滅菌法
是指用紫外線照射殺滅微生物的方法。一般用於滅菌的紫外線波長是200~300nm，滅菌力最強的波長是253.7nm。紫外線作用於核酸蛋白促使其變性，同時空氣受紫外線照射後產生微量臭氧，從而起共同殺菌作用。紫外線進行直線傳播，可被不同的表麵反射，穿透力微弱，但較易穿透清潔空氣及純淨的水。因此本法適用於照射物體表麵之滅菌、無菌室的空氣及水的滅菌；不適用於藥液的滅菌、固體物質深部的滅菌；普通玻璃可吸收紫外線，因此裝於玻璃容器中的藥物不能用此法滅菌。紫外線對人體照射過久，會發生結膜炎，紅斑及皮膚燒灼等現象，故一般在人入室前開啟紫外線燈1~2小時，關閉後人才進入潔淨室。如果必須在人進去後仍要開紫外線滅菌，則人的皮膚及眼睛應有有效的防護措施。一般在6~15m3的空間可裝置30瓦紫外線燈一盞，離地麵2.5~3m為宜。
用紫外線照射滅菌時要注意下列問題：
1、紫外線的殺菌力，隨使用時間增加而減退，一般使用時間達到額定時間70%時應更換紫外線燈管，以保證殺菌效果。國產紫外線燈平均壽命一般為2000h。
2、紫外線的殺菌作用隨菌種不同而不同，殺黴菌的照射量要比殺杆菌大40~50倍。
3、紫外線照射通常按相對濕度為60%的基礎設計，室內濕度增加時，照射量應相應增加。
4、紫外線滅菌效果與照射的時間長短有關，這需要通過驗證來確定照射時間。
5、紫外照射燈的安裝形式及高度，應根據實際情況,參考使用說明決定。
滅菌方法的驗證采用生物指示劑挑戰試驗，生物指示劑多用枯草芽孢杆菌。
（三）微波滅菌法
微波是指頻率在30~3000MHz之間的電磁波。水可強烈地吸收微波，使其極性分子轉動，分子間的磨擦而生熱，且升溫迅速，靠熱力而滅菌。在數十秒至幾分鍾之內可達100～150℃，並全部殺死液體中的微生物，適於水溶性注射液的滅菌。另外，固體藥材飲片及固體製劑（丸劑、散劑、膠囊粉等）也含少量水分，微波能穿透到固體內部，由表至裏被均勻加熱，而起幹燥、滅菌的作用。多用於口服液體製劑的滅菌，有望用於注射液的滅菌。但可能對某些藥品的PH值、含量、顏色有影響。
（四）輻射滅菌法
輻射滅菌是應用γ射線、β射線殺滅細菌的方法，又稱電離輻射，前者由鈷-60或銫-137發出，穿透力強；後者由電子加速器產生，帶電荷，穿透力弱，滅菌效果差。
化學滅菌法
化學滅菌法係指用化學藥品來殺滅微生物的方法。同一種化學藥品的低濃度時呈現抑菌作用，而在高濃度時則能起殺菌作用。其殺菌機理可能是：能使微生物蛋白質變性死亡，或與酶係統結合影響代謝，或改變膜壁通透性使微生物死亡等。常用的方法有消毒劑消毒法和化學氣體滅菌法等。
（一）消毒劑消毒法
消毒是指殺死病原微生物的方法。但化學消毒劑大多僅能殺死微生物的繁殖體而不能殺死芽孢，能控製一定範圍的無菌狀態。可將消毒劑配成適宜濃度，采用噴淋、塗擦或浸泡等方法對物料、環境、器具等進行消毒。常用的化學消毒劑有0.1%～0.2%苯紮溴銨溶液、3%～5%的酚或煤酚皂溶液、75%乙醇等。常用於物體表麵滅菌。但要注意其濃度不要過高，以防止化學腐蝕作用。潔淨室的牆麵、天花板、門窗、機器設備、儀器、操作台、車、桌、椅等表麵以及人體雙手（手套）在環境驗證及日常生產時，應定期清潔並用消毒劑噴灑，無菌室用的消毒劑必須在層流工作台中，用0.22μm的濾膜過濾後方能使用。
（二）化學氣體滅菌法
係指利用化學藥品的氣體或產生的蒸汽進行殺滅微生物的方法。
1.環氧乙烷滅菌法
環氧乙烷滅菌法是利用環氧乙烷氣體進行殺菌的方法。它是一種傳統的滅菌方法，可應用於工衣滅菌、不耐加熱滅菌的藥品、醫用器具、設施、設備等的滅菌。
環氧乙烷滅菌係統，主要有下列四項互相製約的重要因素影響滅菌效果：
1、溫度；2、濕度；3、氣體濃度；4、滅菌時間。
因為環氧乙烷是易燃易爆物質，明火可以引起燃燒，同時由於氣體分解還可能引起爆炸，環氧乙烷滅菌中應十分注意安全問題。
2.甲醛等蒸汽熏蒸法
采用甲醛、丙二醇或過氧醋酸等化學品，通過加熱產生蒸汽進行空氣環境滅菌。
(1)、計算房間體積，按10g/m3的比例稱出甲醛。
(2)、將甲醛倒入甲醛發生器或加熱盤或燒杯中，並放好加濕用水，必要時還需加入高錳酸鉀（2~3g/m3），然後加熱（甲醛發生器用蒸汽加熱，加熱盤或燒杯用熱水盛入其中加熱）使其蒸發成氣體。
(3)、滅菌流程：空調器停止運轉→啟動甲醛氣體發生器或在加熱盤中加熱甲醛 →讓甲醛氣體擴散約30分鍾→啟動空調器讓甲醛氣體循環約30分鍾→停止空調器，房間熏蒸消毒，時間不少於8小時→ 房間排氣，用新鮮空氣置換約2小時→ 恢複正常運行。
當相對濕度在65%以上，溫度在24~40℃時，甲醛氣體的消毒效果最好。
3、臭氧消毒法
臭氧（O3）的消毒原理是：臭氧在常溫、常壓下分子結構不穩定，很快自行分解成氧（O2）和單個氧原子（O），後者具有很強的活性，對細菌有極強的氧化作用，臭氧氧化分解了細菌內部氧化葡萄糖所必須的酶，從而破壞其細胞膜，將其殺死。多餘的氧原子則會自行重新結合成為普遍氧分子（O2），不存在任何有害殘留物，故稱為無汙染消毒劑。它不但對種種細菌（包括肝炎病毒、大腸杆菌、綠膿杆菌及雜菌等）有極強的殺滅能力，而且對黴菌也很有效。
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