低溫保存管中之一般菌種臨時存放及活化
A. 低溫保存管之臨時存放及解凍中之一般菌種臨時存放及活化
1. 低溫保存管（cryo tube）應存放於－20℃ ~ －80℃之低溫條件下。
2. 準備 37℃之 70﹪（V/V）酒精浴槽（隻能在電氣水浴槽中改放酒精，不可以火加溫，以免危險；若以 37℃水浴取代，應避免水中微生物汙染），其中事先安放小試管架（可放置 cryo tube 之大小），液麵不可高達管塞。
3. 將 cryo tube 從低溫保存條件中取出，置於 37℃浴槽之小試管架上。
4. 不斷輕微搖動 cryo tube，液麵不可高至管塞，直至結冰完全溶解（約需 2 分鍾）。
B. 菌株活化: 在無菌操作下1. 用無菌微量吸管，從已溶解之cryo tube 吸取 1-2滴之菌液，滴入固態指定培養基(培養基編號及溫度示於菌株訂購單)某一邊緣附近，以劃線法接種於培養基。
2.將接種好的培養基置於指定溫度的培養箱中培養。
C. 劃線法1. 手持金屬接種環，用酒精燈將接種環（共約5公分）燒至火紅，並不斷來回燒烤金屬固定杆之前約10公分，等待約10秒鍾，將接種環前端輕觸培養基邊緣凝膠（無菌體部份），待接種環完全冷卻後，以環沾黏菌滴，由培養基邊緣向中央輕輕橫劃緊接的並行線，直到涵蓋1/3培養基為止（I區）。
2. 灼燒接種環，待數秒冷卻後，旋轉培養基自I區塗布的邊緣再橫劃數條線到未接種的區域（II區）。
3. 重複2的動作完成III 區與IV 區。
4. 灼燒接種環，將接種環歸位。
D. 圖示
（1）金屬接種環
（2）平板劃線法
冷凍幹燥管之開管說明
下列步驟請在無菌環境下操作：
1、以沾有70%酒精的棉花，擦拭外管，在火焰上加熱外管之尖端。
2、滴數滴無菌水於加熱處，使外管破裂，再以硬棒敲破尖端。
3、取出隔熱纖維紙和內管，以滅菌過的鑷子取出內管之棉塞。
4、( a ) 適用於細菌 用無菌吸管，吸取0.3-0.5 ml指定之液體培養基，滴入內管內，並輕微震蕩（可用該吸管協助），直到均勻懸浮。( b ) 適用於黴菌、酵母菌 用無菌吸管，吸取0.3-0.5 ml無菌水，滴入內管內，待幹燥粉末溶解後，以無菌吸管吸取並滴入約含有5ml無菌水之試管內，輕微震蕩使其均勻後，靜置30至60分鍾。
5、取0.1-0.2 ml之菌體懸浮液於指定的平板培養基上，做劃線分離培養或做成一係列之稀釋，用無菌L型玻棒均勻塗抹，以檢驗菌種之純度及活化情形，而剩餘的菌體則全部移入指定的液體培養基內，並依指定的溫度培養之。
6、某些菌種經過冷凍幹燥保存後，遲滯期 ( lag period ) 較長，必須等培養二倍時間後才能長出，且再經過一、二次繼代培養 (Subculture) 後才能正常生長。經過以上的努力後仍培養失敗，才視為不能活化。
7、若菌種未能活化，或活化之菌落有疑問時，請於收到菌種之一個月內，以問題菌株反應單傳真至本中心，即進行處理。
8．未開封之冷凍幹燥管，請冷藏於4℃冰箱，切勿冷凍保存。
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