管碟法是國內外常用的抗生素微生物檢定法，利用管碟法測定抗生素效價，具有準確、直觀、重複性好等優點，因而被廣泛采用。但是整個試驗過程中影響結果的因素很多，任何一個環節操作不當或者忽略就會造成很大誤差，導致整組試驗失敗。其中，芽孢懸液的製備就有很多需要注意的地方。
在用管碟法檢定抗生素時，需要將菌懸液與培養基混合均勻、覆蓋在底層培養基上，以形成抑菌圈。其中，對於菌懸液的製備要求為：
將所用菌的斜麵培養物用1~2ml滅菌水洗下，形成菌懸液；將菌懸液在營養瓊脂平皿上均勻塗布，置於35-37℃條件下培養7天；塗片、染色，鏡檢芽孢率≥85%時，用10ml滅菌水將芽孢和菌體的混合物洗下，製成懸液；65℃水浴加熱30min，殺死菌體，形成有活性的芽孢懸液；冷卻、冰箱中保存備用。
根據實際操作中的經驗，對這一環節需要注意的事項總結如下：
1 應該嚴格按照標準操作，將塗好的平皿連續培養7天再洗脫芽孢，這樣也有助於芽孢懸液的均一性，避免由於操作標準不一造成的試驗結果的偏差。有文章報道，將平板培養至2、3、4、5、6天與培養至第七天，製成的懸液在抗生素效價測定中無差異；但本人在實際試驗中發現，培養3天的短小芽孢菌，鏡檢時芽孢率<80%,並且平皿一旦從培養箱中拿出來，室溫放置至第10天，芽孢率也不會再發生明顯變化，這顯然不符合《中國獸藥典》規定的芽孢率≥85%的要求。
2試驗菌的菌齡對抑菌圈有一定影響。故檢定時應保持菌種及菌液的新鮮。一般菌種一月轉種一次，冰箱冷藏保存。對易變異的菌株，如藤黃微球菌等在製備菌懸液前進行單菌分離；其他菌株可半年分離一次。
3 試驗菌傳代最好不超過5次，以防止菌種老化變異。芽孢杆菌培養物用滅菌水洗下後，應在65℃加熱30分鍾，使菌體的菌齡一致（有資料顯示可70-75℃水浴30min殺死菌體）。
4 加入菌懸液的體積，一般不少於0.3ml，並且不大於上層培養基體積的1%（有資料說不大於2%）。如果加入菌懸液的體積過小，則在同次實驗中，不同次加入菌懸液的體積相差較大， 造成實驗誤差；如果加入菌懸液的體積過大，則會使上層培養基變稀，並且因菌懸液的溫度較低，加至培養基中可能造成培養基結塊，影響測定結果。對於加入菌懸液體積的控製，可通過調節菌懸液的濃度來實現。
下麵為在betway必威西汉姆联生物技術公司生產的抗生素檢定Ⅳ號瓊脂上，莫能菌素對短小芽孢菌的抑菌效果：
圖a 連續培養7天的短小芽孢菌
圖b 莫能菌素對短小芽孢菌的抑菌效果
從照片可以看出，菌懸液中芽孢率符合要求（≥85%），抑菌圈透明、邊緣清晰且直徑均勻，符合標準規定的18-22mm，效果非常好！
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