結晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)培養基為選擇性計數固體培養基,主要用於大腸菌群平板計數檢驗。該培養基的配製及使用方法為:稱取本品 41.5g,加熱溶解於1000ml 蒸餾水中,煮沸不要超過2 分鍾。取適宜稀釋度樣品液 1ml,加入到無菌平皿中心,將冷至 45℃ ± 0.5℃ 的 VRBA 10-15ml傾注於平皿中。小心旋轉平皿將培養基與樣液充分混勻。凝固後,再加3-4ml VRBA 覆蓋平板表層 ,翻轉平板,置於36 ± 1℃培養 18-24 小時。無需高壓滅菌。臨用時製備,不得超過3小時。
VRBA的使用方法與其他培養基的不同之處在於:1、無需高壓滅菌,煮沸不超過2分鍾,必須現用現配。2、該培養基在傾注第一層凝固之後需要再用VRBA覆蓋一層,然後再進行培養。
為什麽每個平板上均要傾倒兩次結晶紫中性紅膽鹽培養基?主要是為了防止表麵有遷徙性細菌生長,因為一旦有遷徙性菌落生長蔓延,那這塊平板就很難能夠清楚的計數了。再倒一次瓊脂把可能存在的遷徙性菌落封在瓊脂內,讓其不能蔓延開來,這樣就不會對結果觀察造成影響了。所以再次傾倒可以防止菌落蔓延導致無法計數的現象發生。
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