1、菌種活化:幹粉標準菌株 標準貯備菌株 工作菌株;
1.1金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢杆菌標準菌株:挑取部分幹粉溶解於0.9%無菌氯化鈉溶液中,劃線接種於營養瓊脂平板上,36℃±1℃培養18-24小時。並觀察菌落形態。
a.金黃色葡萄球菌:菌落凸起,圓形,不透明;b.大腸埃希氏菌:菌落稍凸,圓形,濕潤,乳白色;c.銅綠假單胞菌:菌落扁平,圓形,邊緣不整齊,光滑濕潤,可產生藍綠或黃綠色素;d. 枯草芽孢杆菌:表麵粗糙不透明,鏡檢菌體有芽孢。
1.2白色念珠菌:挑取部分幹粉溶解於0.9%無菌氯化鈉溶液中,劃線接種於改良馬丁瓊脂培養基平板或PDA瓊脂平板上,30℃-35℃培養24-48小時。本菌細胞呈卵圓形,很象酵母菌,比葡萄球菌大5~6倍,革蘭氏染色陽性,但著色不均勻。
黑曲黴:挑取部分幹粉溶解於0.9%無菌氯化鈉溶液中,劃線接種於改良馬丁瓊脂斜麵培養基上,23℃-28℃培養48-96小時。菌叢呈黑褐色,粗糙。
1.3生孢梭菌:挑取部分幹粉溶解於0.9%無菌氯化鈉溶液中,接種於硫乙醇酸鹽流體培養基中,30℃~35℃培養18-24小時;或在厭氧條件下接種於哥倫比亞瓊脂上,30℃~35℃厭氧培養18-24小時。
2、菌種鑒定:
2.1金黃色葡萄球菌:
革蘭氏染色試驗:革蘭氏陽性菌(紫色),葡萄狀排列,球菌。
兔血漿試驗:接種1個單菌落於1支兔血漿溶液中,30℃-35℃培養至6小時,每半小時觀察一次。凝固為陽性。金黃色葡萄球菌為陽性反應。
2.2大腸埃希氏菌:
革蘭氏染色試驗:革蘭氏陰性杆菌,紅色。
IMVC生化試驗:
2.3銅綠假單胞菌:
革蘭氏染色試驗:革蘭氏陰性杆菌,紅色。
氧化酶試驗:將氧化酶試紙用蒸餾水浸濕,用細玻璃棒或一次性接種針挑取單個菌落,塗在試紙上。在60s內變為藍色或藍紫色為陽性,不變色為陰性。
綠膿菌素試驗:取斜麵培養物接種於PDP瓊脂培養基斜麵上,培養24小時,加三氯甲烷3~5ml至培養管中,攪碎培養基並充分振搖。靜置片刻,將三氯甲烷相移至另一試管中,加入1mol/L鹽酸試液約1ml,振搖後,靜置片刻,觀察。若鹽酸溶液呈粉紅色,為綠膿菌素試驗陽性,否則為陰性。本菌為綠膿菌素試驗陽性。
熒光試驗:接種於金氏B培養基(或假單胞菌產熒光色素培養基)上,36℃±1℃培養18-24小時,在366nm紫色燈下有藍綠色熒光。
2.4枯草芽孢杆菌:
菌落形態:表麵粗糙不透明,有皺摺。
鏡檢:用芽孢染色液染色,菌體有芽孢。
2.5白色念珠菌:
革蘭氏染色試驗:呈卵圓形,很象酵母菌,比葡萄球菌大5~6倍,革蘭氏染色陽性,但著色不均勻。
念球菌顯色培養基:30-35℃培養24-48小時,呈綠色菌落。
產芽管試驗:挑取1%吐溫80-玉米瓊脂培養基上的培養物,接種於加有一滴血清的載玻片上,蓋上蓋玻片,置濕潤的平皿內,置35~37℃、1~3小時,置顯微鏡下觀察,可見到由孢子長出短小芽管。
2.6黑曲黴:23℃-28℃培養48-96小時。菌叢呈黑褐色,粗糙,有黑色孢子產生。
2.7生孢梭菌:
革蘭氏染色試驗:革蘭陽性梭菌,有或無卵圓形或球形的芽孢。
哥倫比亞瓊脂培養基試驗:接種於含慶大黴素的哥倫比亞瓊脂培養基平板上,置厭氧條件下培養48~72小時,應生長。
過氧化氫酶試驗:滴加3%過氧化氫試液,若菌落表麵有氣泡產生,為過氧化氫酶試驗陽性,否則為陰性。本菌為陰性反應。
3、需購買試劑:
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