摘要
目前藥敏試驗一般采用牛津杯法,其過程繁瑣,需要專用的陶瓦蓋。本研究采用HB四連式牛津杯替代牛津杯進行藥敏試驗,其操作過程簡單,可以在一次性平皿中進行試驗,節省成本,其效果與牛津杯接近,可以替代牛津杯進行藥敏試驗。
試驗方法
1、菌懸液的製備
將菌種接種於營養瓊脂斜麵上生長,用生理鹽水將菌苔洗下,震蕩混勻。
2、抗生素溶液的製備
按照《中國藥典》中抗生素濃度標準配製。
3、倒平板及接種
取直徑為90mm、高度為14mm的一次性平皿,注入約15mL加熱融化的培養基,使其在平皿底內均勻攤布,放置在水平台麵上使其凝固,作為底層。另取適量培養基加熱融化後,放冷至48-50℃(芽孢可至60℃),加入適量的菌懸液(能得到清晰的抑菌圈為度),搖勻,再向平皿中注入約5mL,使在底層上均勻攤布,作為菌層(試驗的關鍵是固體培養基表明平整),放置在水平台上冷卻。
4、放置HB四連式牛津杯及添加抗生素
HB四連式牛津杯已經輻照滅菌,可以直接使用。用無菌鑷子夾住HB四連式牛津杯正麵的凸點(標有“betway必威西汉姆联生物”的為正麵),將其放置在菌層培養基表麵上,用壓杯板放置在HB四連式牛津杯10秒左右,使其底部與培養基接觸緊密,防止漏液。對角的2個小管分別滴入高濃度的抗生素溶液,另一對角的2個小管分別滴入低濃度的抗生素溶液。
5、培養及檢定
小心平穩的將平皿在規定的條件下培養,然後測量各個抑菌圈直徑,HB四連式牛津杯產生的抑菌圈直徑與傳統的牛津杯產生的抑菌圈直徑基本一致,說明HB四連式牛津杯可以替代傳統牛津杯,如下圖所示。
牛津杯與HB四連式牛津杯產生的抑菌圈
結論
HB四連式牛津杯操作方便簡單;試驗條件簡單,可以在一次性平皿中進行,不必在陶瓦蓋中進行,節省成本;重複性高,穩定性好,產生的抑菌圈直徑與牛津杯直徑很接近。因此可以替代牛津杯來進行藥敏試驗。
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