l.乳酸苯酚固定液 乳酸10g, 結晶苯酚10g, 甘油20g, 蒸餾水10 mL。
2. 1.6%溴甲酚紫 溴甲酚紫1.6g溶於100mL乙醇中,貯存於棕色瓶中保存備用。用作培養基指示劑時,每1000mL培養基中加入lmL 1.6%溴甲酚紫即可。
3. V.P.試劑 CuSO4 1g,蒸餾水l0mL,濃氨水40mL,10% NaOH 950mL。先將CuSO4溶於蒸餾水中,然後加濃氨水,最後加入10%NaOH。
4. 0.02%甲基紅試劑 甲基紅0.1g,95% 乙醇760mL,蒸餾水100mL。
5. 吲哚反應試劑 對二甲基氨基苯甲醛8g, 95%乙醇760mL,濃HCl160mL。
6. Alsever’s血細胞保存液 葡萄糖2.05g, 檸橡酸鈉0.8g, NaCl 0.42g,蒸餾水l00mL。以上成分混勻後,微加溫使其溶解後,用檸檬酸調節pH 6.1,分裝於三角瓶中(30~50mL/瓶), 113℃濕熱滅菌15min,備用。
7. Hank’s液
(l)貯存液A液:(I)NaCl 80g, KCl 4g, MgSO4•7H2O 1g,MgCl2•6H2O 1g,用雙蒸餾水定容至450mL:(II)CaCl2 1.4g (或CaCl2•2H2O 1.85g) 用雙蒸餾水定容至50mL。將I和II液混合,加氯仿1mL即成A液。
(2)貯存液B液:Na2HPO4•12H2O 1.52g,KH2PO4 0.6g, 酚紅0.2g, 葡萄糖10g,用雙蒸餾水定容至500mL,然後加氯仿1mL,酚紅應先置研缽內磨細,然後按配方順序一一溶解。
(3)應用液:取上述貯存液的A和B液各25mL,加雙蒸餾水定容至450mL,113℃濕熱滅菌20min。置4℃下保存。使用前用無菌的3% NaHCO3調至所需pH。
注意:藥品必須全部用A.R試劑,並按配方順序加入,用適量雙蒸餾水溶解,待前一種藥品完全溶解後再加入後一種藥品,最後補足水到總量。
(4)10%小牛血清的Hank’s液:小牛血清必須先經56℃、30min滅活後才可使用,應小瓶分裝保存,長期備用。用時按10%用量加至應用液中。
8. 0.1mol/LCaCl2溶液 雙蒸餾水900mL,CaCl2 11g,定容至lL,可用孔徑為0.22μm的濾器過濾除菌或12l℃濕熱滅菌20min。
9. 0.05mol/L CaCl2溶液 雙蒸餾水900mL,CaCl2 5.5g, 定容至lL,可用孔徑為0.22μm的濾器過濾除菌或12l℃濕熱滅菌20min。
10. α澱粉酶活力測定試劑
(1)碘原液:稱取碘11g, 碘化鉀22g,加水溶解定容至500mL。
(2)標準稀碘液:取碘原液15mL,加碘化鉀8g,定容至500mL。
(3 )比色稀碘液:取碘原液2mL,加碘化鉀20g,定容至500mL。
(4)2%可溶性澱粉:稱取幹燥可溶性澱粉2g,先以少許蒸餾水混合均勻,再徐徐傾入煮沸的蒸餾水中,繼續煮沸2min,待冷卻後定容至100 mL(此液當天配製使用)。
(5)標準糊精液:稱取分析純糊精0.3g,用少許蒸餾水混勻後傾入400mL水中,冷卻後定容至500mL,加入幾滴甲苯試劑防腐,冰箱保存。
11. pH6.0磷酸氫二鈉-檸檬酸緩衝液
稱取Na2HPO4•12H2O 45.23g,檸檬酸(C6H8O7•H20) 8.07g,加蒸餾水定容至1000mL。
12. 0.lmol/L磷酸緩衝液(pH7.0) 稱取Na2HPO4•12H2O 35.82g,溶於1000mL蒸餾水中,為A液:稱取NaH2PO4•2H2O15.605g,溶於l000mL蒸餾水中,為B液。取A液61mL, B液39mL,可得到100mL 0.lmol/L pH7.0的磷酸緩衝液。
13.測定乳酸的試劑
(l)pH9.0緩衝液:在300mL容量瓶中加入甘氨酸11.4g, 24%NaOH 2mL,加275mL蒸餾水。
(2)NAD溶液:NAD 600mg溶於20mL蒸餾水中。
(3)L(+)LDH:加5mg L(+)LDH於lmL蒸餾水中。
(4)D(-)LDH:加2mg D(-)LDH於lmL蒸餾水中。
14. Taq緩衝液(10×) Tris-HCl (pH8.4) 100mmol/L,KCl 500mmol/L,MgCl2 15mmol/L,BSA (牛血清清蛋白) 或明膠lmg/mL
15. dNTP混合液 dATP 50mmol/L,dCTP 50mmol/L,dGTP 50mmol/L, dTTP 50mmol/L。
16. 1%瓊脂糖 瓊脂糖lg, TAE100mL, 100℃融化後待涼至40℃倒膠,膠厚度約0.4~0.6。
17. TAE Tris堿4.84mL,冰乙酸1.l4mL,0.5mol/L pH8.0的EDTA - Na2•2H2O (乙二胺四乙酸鈉鹽) 2mL
18. 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 在800mL蒸餾水中加186.lg EDTA,劇烈攪拌,用NaOH調pH至8.0(約20g顆粒),定容至lL,分裝後121℃濕熱滅菌備用。
19.硝酸鹽還原試劑
(1)格裏斯氏(Griess)試劑
A液:對氨基苯磺酸0.5g,稀醋酸(10%左右)150mL
B液:α萘胺0.1g,蒸餾水20mL, 稀醋酸(10%左右)150 mL
(2)二苯胺試劑:二苯胺0.5g溶於l00mL濃硫酸中,用20 mL蒸餾水稀釋。
在培養液中滴加A、B液後溶液如變為粉紅色、玫瑰紅色、橙色或棕色等表示有亞硝酸鹽還原,反應為陽性,如無色出現則可加1~2滴二苯胺試劑:如溶液呈藍色則表示培養液中仍存在有硝酸鹽,從而證實該菌無硝酸鹽還原作用:如溶液不呈藍色,則表示形成的亞硝酸鹽已進一步還原成其他物質,故硝酸鹽還原反應仍為陽性。
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