一、目的要求
l．學習水樣的采取方法和水樣細菌總數測定的方法。
2．了解水源水的平板菌落計數的原則。
二、基本原理
本實驗應用平板菌落計數技術測定水中細菌總數。由於水中細菌種類繁多，它們對營養和其他生長條件的要求差別很大，不可能找到一種培養基在一種條件下，使水中所有的細菌均能生長繁殖，因此，以一定的培養基平板上生長出來的菌落，計算出來的水中細菌總數僅是一種近似值。目前一般是采用普通肉膏蛋白腖瓊脂培養基。
三、器材
l．培養基 肉膏蛋白腖瓊脂培養基，無菌水。
2.儀器或其他用具 滅菌三角燒瓶，滅菌的帶玻璃塞瓶，滅菌培養皿，滅菌吸管，滅菌試管等。
四、操作步驟
l．水樣的采取
(1)自來水 先將自來水龍頭用火焰燒灼3min滅菌，再開放水龍頭使水流5min後，以滅菌三角燒瓶接取水樣，以待分析。
(2)池水、河水或湖水 應取距水麵l0～15cm的深層水樣，先將滅菌的帶玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然後翻轉過來，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛滿後，將瓶塞蓋好，再從水中取出，最好立即檢查，否則需放入冰箱中保存。
2．細菌總數測定
(1)自來水
①用滅菌吸管吸取lml水樣，注入滅菌培養皿中。共做兩個平皿。
②分別傾注約15mL己溶化並冷卻到45℃左右的肉膏蛋白腖瓊脂培養基，並立即在桌上作平麵旋搖，使水樣與培養基充分混勻。
③另取一空的滅菌培養皿，傾注肉膏蛋白腖瓊脂培養基15mL作空自對照。
④培養基凝固後，倒置於37℃ 溫箱中，培養24h，進行菌落計數。
⑤兩個平板的平均菌落數即為lml水樣的細菌總數。
(2)池水、河水或湖水等
①稀釋水樣 取3個滅菌空試管，分別加入9ml滅菌水。取lml水樣注入第一管9ml滅菌水內、搖勻，再自第一管取1ml至下一管滅菌水內，如此稀釋到第三管，稀釋度分別為10-1、10-2與10-3。稀釋倍數看水樣汙濁程度而定，以培養後平板的菌落數在30～300個之間的稀釋度最為合適，若三個稀釋度的菌數均多到無法計數或少到無法計數，則需繼續稀釋或減小稀釋倍數。
一般中等汙穢水樣，取10-1、10-2、10-3三個連續稀釋度，汙穢嚴重的取10-2、10-3 、10-4三個連續稀釋度。
②自最後三個稀釋度的試管中各取lmL稀釋水加入空的滅菌培養皿中，每一稀釋度做兩個培養皿。
③各傾注15ml已溶化並冷卻至45℃左右的肉膏蛋白腖瓊脂培養基，立即放在桌上搖勻。
④凝固後倒置於37℃培養箱中培養24h。
3．菌落計數方法
(1)先計算相同稀釋度的平均菌落數。若其中一個平板有較大片狀菌苔生長時，則不應采用，而應以無片狀菌苔生長的平板作為該稀釋度的平均菌落數。若片狀菌苔的大小不到平板的一半，而其餘的一半菌落分布又很均勻時，則可將此一半的菌落數乘2以代表全平板的菌落數，然後再計算該稀釋度的平均菌落數。
(2)首先選擇平均菌落數在30~300之間的，當隻有一個稀釋度的平均菌落數符合此範圍時，則以該平均菌落數乘其稀釋倍數即為該水樣的細菌總數(見表26-1，例1)。
(3)若有兩個稀釋度的平均菌落數均在30～300之間，則按兩者菌落總數之比值來決定。若其比值小於2，應采取兩者的平均數；若大於2，則取其中較小的菌落總數(見表26-l，例2及例3)。
(4)若所有稀釋度的平均菌落數均大於300，則應按稀釋度最高的平均菌落數乘以稀釋倍數(見表26-l，例4)。
(5)若所有稀釋度的平均菌落數均小於30，則應按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋倍數(見表26-l，例5)。
(6)若所有稀釋度的平均菌落數均不在30～300之間，則以最近300或30的平均菌落數乘以稀釋倍數(見表26-1，例6)。
五、實驗報告
1．結果
（1）自來水
（2）池水、河水或湖水等
2．思考題
（1）從自來水的細菌總數結果來看，是否合乎飲用水的標準？
（2）你所測的水源水的汙穢程度如何？
（3）國家對自來水的細菌總數有一標準，那麽各地能否自行設計其測定條件（諸如培養溫度，培養時間等）來測定水樣總數呢？為什麽？
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