1.方法提要
本標準采用的的方法是計數濃度法，即通過收集懸浮在空氣中的生物性粒子於專門的培養基（選擇能證實其能夠支持微生物生長的培養基），經若幹時間和適宜的生長條件讓其繁殖到可見的菌落計數，以判定該潔淨室的微生物濃度。
2.人員的職責及培訓
潔淨室（區）的測試人員應進行本專業的培訓並獲得相應資格後才能履行對潔淨室（區）測試的職責，其中包含涉及的衛生知識和基本微生物知識。
潔淨室（區）的測試人員應選擇與生產操作的空氣潔淨度級別要求相適應的穿戴方式，外麵的衣服不能帶進100000級以上的區域。
3.儀器、輔助設備和培養基
選擇合適的浮遊菌采樣器，包括采用無油的抽氣泵，較低的氣流流速和較大的采樣流量，以保證培養基表麵的水分不被吹幹。
本測試需要具備儀器、輔助設備和培養基如下：
a)浮遊菌采樣器；
b)培養皿；
c)培養基（大豆酪蛋白瓊脂培養基、沙氏瓊脂培養基）
d)恒溫培養箱；
e)高壓蒸汽滅菌器。
4.浮遊菌采樣器原理
浮遊菌采樣器一般采用撞擊法原理，可分為狹縫式采樣器、離心式或針孔式采樣器。狹縫式采樣器由內部風機將氣流吸入，通過采樣器的狹縫式平板，將采集的空氣噴射並撞擊到緩慢旋轉的平板培養基表麵上，附著的活微生物粒子經培養後形成菌落。離心式采樣器由於內部風機的高速旋轉，氣流從采樣器前部吸入從後部流出，在離心力的作用下，空氣中的活微生物的粒子有足夠的時間撞擊到專用的固形培養基條上，附著的活微生物粒子經培養後形成菌落。針孔式采樣器是氣流通過一個金屬蓋吸入，蓋子上是密集的經過機械加工的特質小孔，通過風機將收集的細小的空氣流直接撞擊到平板培養基表麵上，附著的活微生物粒子經培養後形成菌落。
5測試要點
5.1必須按照測試儀器的檢定周期，定期對儀器作檢定。使用校驗合格，且在使用有效期內的儀器。
5.2測試儀器在未進入被測區域時，若必需，則先清潔表麵，或在相應的潔淨室內準備和存放（用保護罩或其他適當地外罩保護儀器）。
5.3在100級潔淨室內用紙時，上麵應蒙上一張透明不沾塵的覆蓋物，在100級潔淨室內不能用鉛筆盒橡皮。
5.4使用測試儀器時應嚴格按照儀器說明書操作。
5.4.1儀器開機，預熱至穩定後，方可按儀器說明書的規定對儀器進行校正，同時檢查采樣流量，並根據采樣量設定采樣時間。
5.4.2采樣口必須用便於消毒及化學性能穩定的材料製造。
5.4.3采樣管嚴禁滲漏，內壁應光滑。
5.4.4采樣管的長度應根據測點的高度定，盡量減少彎曲。
6培養皿
6.1一般采用90mm×15mm規格的培養皿。可根據所選用采樣器選擇合適的培養皿。
6.2離心式采樣器采用專用的固形培養條。
7培養基
大豆酪蛋白瓊脂培養基（TSA）或沙氏培養基（SDA）或其他用戶認可並經驗證了的培養基。其配製方法見附錄B。
8恒溫培養箱
必須定期對恒溫培養箱進行校驗。
9測試步驟
9.1測試前儀器、培養皿表麵必須嚴格消毒。
9.1.1采樣器進入被測房間前先用消毒房間的消毒劑滅菌，用於100級潔淨室的采樣器宜預先放在被測房間內。
9.1.2用消毒劑擦淨培養皿的外表麵。
9.1.3采樣前，先用消毒劑清洗采樣器的頂蓋、轉盤以及罩子的內外麵，采樣結束，再用消毒劑輕輕噴射罩子的內壁和轉盤。
9.1.4采樣口及采樣管，使用前必須高溫滅菌。如果消毒劑對采樣管的外壁及內壁進行消毒時，應將管中的殘留液倒掉晾幹。
9.1.5采樣者應穿戴與被測潔淨區域相應的工作服，在轉盤上放入或調換培養皿前，雙手用消毒劑消毒或戴無菌手套操作。
9.1.6采樣儀器經消毒後先不放入培養皿，開啟浮遊菌采樣器，使儀器中的殘餘消毒劑蒸發，時間不少於5min，並檢查流量並根據采樣量調整設定采樣時間。
9.1.7關閉浮遊菌采樣器，放入培養皿，蓋上蓋子。
9.1.8置采樣口於采樣點後，開啟浮遊菌采樣器進行采樣。
10培養
10.1全部采樣結束後，將培養皿倒置於恒溫培養箱中培養。
10.2采用大豆酪蛋白瓊脂培養基（TSA）配製的培養皿經采樣後，在30℃~35℃培養箱中培養，時間不少於2d；采用沙氏培養基（SDA）配製的培養皿經采樣後，在20℃~25℃培養箱中培養，時間不少於5d。
10.3每批培養基應有對照試驗，檢驗培養基本身是否汙染。可每批選定3隻培養皿作對照培養。
11菌落計數
11.1用肉眼對培養皿上所有的菌落直接計數，標記或在菌落計數器上點計，然後用5~10倍放大鏡檢查，有否遺漏。
11.2若平板上右2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數。
12注意事項
12.1使用前應仔細檢查每個培養皿的質量，培養基及培養皿有變質、破損或汙染的不能使用。
12.2對培養基、培養條件及其他參數做詳細的記錄。
12.3由於細菌種類繁多，差別甚大，計數時一般用透射光於培養皿背麵或正麵仔細觀察，不要漏計培養皿邊緣生長的菌落，並須注意細菌菌落或培養基沉澱物的區別，必要時用顯微鏡鑒別。
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