1 範圍
本標準規定了食品中β 型溶血性鏈球菌（Streptococcus）的檢驗方法。
本標準適用於食品中β 型溶血性鏈球菌的檢驗。
2 術語和定義
2.1 β 型溶血
在菌落周圍形成完全透明的溶血環，紅細胞完全溶解。
2.2 β 型溶血性鏈球菌
能夠產生β 型溶血的化膿（或A 群）鏈球菌（Streptococcus pyogenes）和無乳（或B 群）鏈球菌
（Streptococcus agalactiae）。
3 設備和材料
除微生物實驗室常規滅菌及培養設備外，其他設備和材料如下：
a) 恒溫培養箱： 36 ℃±1 ℃；
b) 冰箱：2 ℃～5 ℃；
c) 厭氧培養裝置；
d) 天平：感量0.1 g；
e) 均質器與配套均質袋；
f) 顯微鏡：10 倍～100 倍；
g) 無菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸頭；
h) 無菌錐形瓶：容量100 mL、200 mL、2 000 mL；
i) 無菌培養皿：直徑90 mm；
j) pH 計或pH 比色管或精密pH 試紙；
k) 水浴裝置：36 ℃±1 ℃；
l) 微生物生化鑒定係統。
4 培養基和試劑
4.1 改良胰蛋白腖大豆肉湯（Modified tryptone soybean broth, mTSB）：見附錄A 中A.1。
4.2 哥倫比亞CNA 血瓊脂(Columbia CNA blood agar)：見附錄A 中A.2。
4.3 哥倫比亞血瓊脂(Columbia blood agar)：見附錄A 中A.3。
4.4 革蘭氏染色液：見附錄A 中A.4。
4.5 胰蛋白腖大豆肉湯（Tryptone soybean broth, TSB）：見附錄A 中A.5。
4.6 草酸鉀血漿：見附錄A 中A.6。
4.7 0.25％氯化鈣(CaCl2)溶液：見附錄A 中A.7。
4.8 3％過氧化氫(H2O2)溶液：見附錄A 中A.8。
4.9 生化鑒定試劑盒或生化鑒定卡。
5 檢驗程序
溶血性鏈球菌檢驗程序見圖1。
6 操作步驟
6.1 樣品處理及增菌
按無菌操作稱取檢樣25 g（mL），加入盛有225 mL mTSB 的均質袋中，用拍擊式均質器均質1 min～2 min；或加入盛有225 mL mTSB 的均質杯中，以8000 r/min～10000 r/min 均質1 min～2 min。若樣品為液態，振蕩均勻即可。36 ℃±1 ℃培養18 h～24 h。
6.2 分離
將增菌液劃線接種於哥倫比亞CNA 血瓊脂平板，36 ℃±1 ℃厭氧培養18 h～24 h，觀察菌落形態。
溶血性鏈球菌在哥倫比亞CNA 血瓊脂平板上的典型菌落形態為直徑約2 mm～3 mm，灰白色、半透明、光滑、表麵突起、圓形、邊緣整齊，並產生β 型溶血。
6.3 鑒定
6.3.1 分純培養
挑取5 個（如小於5 個則全選）可疑菌落分別接種哥倫比亞血瓊脂平板和TSB 增菌液， 36 ℃±1 ℃培養18 h～24 h。
6.3.2 革蘭氏染色鏡檢
挑取可疑菌落染色鏡檢。β 型溶血性鏈球菌為革蘭氏染色陽性，球形或卵圓形，常排列成短鏈狀。
6.3.3 觸酶試驗
挑取可疑菌落於潔淨的載玻片上，滴加適量3%過氧化氫溶液，立即產生氣泡者為陽性。β 型溶血性鏈球菌觸酶為陰性。
6.3.4 鏈激酶試驗（選做項目）
吸取草酸鉀血漿0.2 mL 於0.8 mL 滅菌生理鹽水中混勻，再加入經36 ℃±1 ℃培養18 h～24 h 的可
疑菌的TSB 培養液0.5 mL 及0.25%氯化鈣溶液0.25 mL，振蕩搖勻，置於36 ℃±1 ℃水浴中10 min，血漿混合物自行凝固（凝固程度至試管倒置，內容物不流動）。繼續36 ℃±1 ℃培養24 h，凝固塊重新完全
溶解為陽性，不溶解為陰性，β 型溶血性鏈球菌為陽性。
6.3.5 其他檢驗
使用生化鑒定試劑盒或生化鑒定卡對可疑菌落進行鑒定。
7 結果與報告
綜合以上試驗結果，報告每25 g（mL）檢樣中檢出或未檢出溶血性鏈球菌。
上一篇：實驗室中的誤差分析
下一篇：保健食品的微生物限量
