一、目的要求
通過母種（一級種）的製作，掌握其製種的技術。
二、方法與步驟
母種培養基製作流程：
設計培養基配方→材料煮汁或藥品溶化→瓊脂溶化→混合定容→調節pH值→分裝→滅菌→倒斜麵→接種→培養→母種（一級種）
l．一級種常用培養基配方
(1)馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基（PDA培養基）
馬鈴薯(去皮)200mg，葡萄糖20.0g，瓊脂2.0g，水l000mL。
(2)馬鈴薯硫酸銨培養基
馬鈴薯200 g，硫酸銨2g，蛋白腖1g，葡萄糖20g，磷酸二氫鉀1g，硫酸鎂1g，瓊脂20g，水1000mL
（3）馬鈴薯葡萄糖蛋白腖培養基
馬鈴薯200g，葡萄糖20g，蛋白腖2g，硫酸鎂0.5g，磷酸氫二鉀1g，維生素B10.5mg, 瓊脂20g，水1000mL。
2．培養基分裝
培養基配製完畢應即時分裝，否則瓊脂凝固，無法分裝，一級種最常用玻璃試管；要安裝好分裝裝置，常用玻璃漏鬥套接乳膠管和尖嘴玻璃接液管，乳膠管上配以止流夾。分裝時左手抓握2～3支試管，右手控製接液管插入試管，注入培養基，裝培養基量為總試管容量的1/5。分裝時應注意不要將培養液沾到試管管口，避免將來發生汙染。若有沾粘，則應用幹淨紗布及時擦淨。分裝的試管直接加棉花塞封口，棉花應用普通棉花，不能用脫脂棉，棉花塞起到過濾空氣的作用，不宜過鬆或過緊，以封口後手持棉塞輕輕搖動試管不脫落，且旋轉撥出順利為度。棉塞外觀要求光滑，不能塞過淺或過深，否則造成操作困難。
3．培養基滅菌和冷卻成斜麵
一般分裝好的試管應當天滅菌，使之呈無菌狀態，以免雜菌自繁，造成培養基變質、酸敗。滅菌時將試管紮成捆，用牛皮紙或其它防潮紙將整捆試管的棉塞包好，直接放入底部盛水的高壓滅菌鍋內，加熱到壓力為l.05kg/cm2，滅菌30min。然後趁熱取出試管，斜臥放置，使之自然冷卻，凝固成斜麵，斜麵為試管長的1/2，冷卻後即成斜麵培養基。
4．一級種的接種培養
將試管中的菌種移接至另外的試管培養基上稱為轉管，其步驟為：
（1）將待接的斜麵試管以及一級種、接種針等放入已消毒的接種箱內。
（2）用75%的酒精溶液棉球擦雙手消毒。
（3）左手持住空白斜麵試管和一級種，右手夾持棉塞，火焰封口。
（4）將接種針頂端燒紅，並將整支接種棒在火焰上過火。
（5）挑取黃豆大小的菌絲瓊脂塊，迅速移接到空白斜麵中央，將棉塞塞回試管。
（6）將已接種好的試管放入恒溫培養箱，在22～26℃下培養，長滿試管即可作為一級種（母種）使用。
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