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化妝品中菌落總數的檢查



錄入時間:2015-6-17 11:45:32 來源:青島betway必威西汉姆联生物

   隨著化妝品使用越來越廣泛。已成為人們日常生活中的必需品。開展化妝品衛生質量監測。是保障人民健康維護消費者的利益,如使用了細菌總數超標的化妝品。會導致皮膚感染 。因此,化妝品細菌總數測定是便於判明樣品被汙染的程度。是對樣品進行衛生學評價的重要依據 。

實驗原理

  菌落總數是指化妝品檢樣經過處理,並在一定條件下培養後,得到的1g或1ml檢樣中所含細菌菌落的總數。
  菌落總數的測定(平板活菌計數法)是根據微生物在固體培養基上所形成的菌落(即由一個單細胞繁殖而成,且肉眼可見的子細胞群體)的生理及培養特征進行的。也就是說,一個菌落即代表一個單細胞。

  測定時,首先將待測樣品製成均勻的、一係列不同稀釋度的稀釋液,並盡量使樣品中的微生物細胞分散,使之成為單個細胞狀態存在(否則1個菌落就不能代表1個菌);再取一定稀釋倍數的一定量稀釋液接種到培養基上,使其均勻分布。菌落由單個細胞生長繁殖而成,因此通過統計菌落的數目,可計算樣品中的含菌數。
  由於所計算出的菌數是培養基上長出來的菌落數,故不包括死菌,因此菌落總數的測定又稱為活菌計數。

菌落總數可作為判定食品被汙染程度的標誌,也可用於觀察細菌在食品中繁殖的動態,以便在對被檢樣品進行衛生學評價時提供依據。
  前邊所述的細菌菌落總數實際上僅為樣品中總細菌數的一部分,其餘細菌皆因種種原因未能長出。每種細菌都有其一定的生理特性,欲將各種細菌都有培養出來,就必須創造各種不同的培養條件,包括營養、溫度、pH、需氧性等,去滿足各種細菌的要求。在實際工作中,不可能也不必要培養出所有的細菌,所得結果隻是能在肉汁營養瓊脂上生長的嗜中溫需氧性的菌落總數。
儀器設備

(1)培養箱:(36±1)℃。
(2)恒溫水浴鍋:(46±1)℃。
(3)天平。
(4)滅菌廣口瓶或三角瓶:500ml。
(5)滅菌培養皿:皿底直徑9.0㎝。
(6)滅菌吸管:1.0㎝、10.1㎝。
(7)滅菌小試管。
(8)玻璃珠:直徑5㎜。
(9)均質機。
(10)滅菌刀、剪刀、鑷子。
(11)酒精燈。

培養基和試劑

(1) 營養瓊脂培養基
成分:
蛋白腖    10g    瓊脂    15~20g
牛肉膏    3g    蒸餾水    1000mL
氯化鈉    5g    pH  7.2~7.4
製法:將除瓊脂以外的各成分溶於蒸餾水中,用15%的NaOHt調節pH使之在7.2~7.4。加入瓊脂,於121℃下高壓滅菌15min
(2) 生理鹽水
成分:
NaCl    0.9g    蒸餾水    100ml
製法:一般每種檢樣配製250ml無菌生理鹽水。稱取2.2gNaCl,加入250ml蒸餾水溶解;分裝於2支大試管中,每支9ml;再量取225ml裝於500ml廣口瓶或三角瓶中,並加入適量的玻璃珠;剩餘的裝入另1支試管中,包紮後於121℃下高壓滅菌15min。
(3) 75﹪的酒精棉球。
實驗步驟

1.菌落總數的檢驗程序(圖1)      
              檢樣
                         ↓
        製成幾個適當倍數的稀釋度
                         ↓
 選擇2~3個適宜的稀釋度,個取1ml加入滅菌培養皿
                         ↓
       每皿內各加入適量的營養瓊脂
          (36±1)℃↓
                    菌落計數
                          ↓
                        報告
            圖1 菌落總數的檢驗程序

   在無菌條件下,將25ml(或25g)檢樣剪碎,放入裝有225ml無菌生理鹽水和適量玻璃珠的500ml廣口瓶或三角瓶內,經充分振搖,形成10-1均勻稀釋液。
   用1ml的無菌吸管吸取10-1稀釋液1ml,注入裝有9ml無菌生理鹽水的試管內,振搖混合均勻,即為10-2稀釋液。再用此吸管吸取10-1稀釋液各1ml於2個培養皿內。
  另取1ml的無菌吸管吸取10-2稀釋液1ml,注入裝有 9ml無菌生理鹽水的試管內,振搖混合均勻,即為10-3稀釋液。再用此吸管吸取10-2稀釋液各1ml於2個培養皿內。
  采用相同的方法吸取10-3稀釋液各1ml於2個培養皿內。

  檢樣在36±1℃下48h後營養瓊脂培養基中細菌的菌落數。


 


 

 

 

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