1適用範圍：適用於定量分析LGG純菌種及LGG乳製品中的LGG菌數量。
2定義：LGG是一種鼠李糖乳杆菌菌株(ATCC 53103)，革蘭氏陽性，過氧化物酶陰性，棒狀，鏈形，不發酵乳糖，對萬古黴素有抗性。
3原理：樣品經稀釋劑稀釋後均質，然後按10倍的稀釋倍數接種到選擇性瓊脂培養基中，厭氧培養，計數所有的菌落，結果以cuf/g計。
注：培養過程中，所有萬古黴素抗性的菌株都會生長（比如所有的鼠李糖乳杆菌，幹酪乳杆菌，胚芽乳杆菌等）。但是，由於LGG不發酵乳糖，所以可以很容易地區分開來。進一步分析鑒定則可采用基因的方法。
4儀器和玻璃器皿
隻要規格可以滿足要求，采用一次性或可重複使用的儀器均可。除了微生物實驗室所常用的儀器外，下列儀器是必需的：
烘箱； 高壓殺菌鍋； 培養箱（37℃±1℃）； 水浴（44-47℃）；
混合器（Peristaltic-type）；帶有無菌塑料袋； 天平。
5培養基和試劑
5.1 稀釋液準備
蛋白棟1.0g； 氯化鈉8.5g； 去離子水1000mL。
若需要，可緩慢加熱至完全溶解。將溶液分至一些瓶子中，然後在高壓殺菌鍋中進行殺菌（121℃±1℃，15分鍾）。殺菌後，溶液pH7.0±0.2。
每個瓶子均可在常溫下貯存半年。
5.2 培養基
5.2.1 MRS瓊脂培養基：適用於純LGG菌種檢測。高壓殺菌後pH6.4±0.2,4-6℃條件下可貯存6個月。
5.2.2 MRS-萬古黴素瓊脂培養基（MRS-V）：適用於LGG菌種與普通酸奶菌種混合後的檢測。萬古黴素50mg/L, 可以在高壓殺菌前加入，也可以作為無菌濾液加入瓊脂中。
5.2.3 MRSL肉湯培養基（檢測乳糖發酵特性）
分別溶解於5-10mL乙醇中，然後加入肉湯中。取5mL試樣，高壓殺菌（121℃±1℃，15分鍾）後作測試用。殺菌後，溶液pH7.2±0.2。
6步驟
6.1 樣品製備
樣品製備前，先放置於室溫下1-2小時，以使其溫度與室溫相同。稱取10g樣品於無菌塑料袋中，加入90ml無菌蛋白腖-氯化鈉水溶液。將塑料袋放入混合器中混合60秒，以確保懸浮液均勻一致。這是第一個稀釋10倍的樣液，該溶液必須繼續按10倍的倍數進行稀釋，且必須在15分鍾內將各樣液接種到培養皿中。
6.2 在選擇性瓊脂培養基中接種
選擇合適的瓊脂培養基：純菌種用MRS瓊脂培養基，混合菌種用MRS-萬古黴素瓊脂培養基。取1mL（傾倒法，即Pour-plate method）或0.1mL（塗抹法，即spread-plate method）每一稀釋度的樣液分別接種到兩個培養皿中，瓊脂的溫度應為44-47℃，然後於厭氧條件下進行培養（37±1℃，72±6小時）。
6.3 菌落計數
計數那些LGG菌落在10-300之間的培養皿。LGG菌落特征：光滑、大、白色、圓形或橢圓形、邊緣清晰。
6.4 確認實驗
為了進一步確認菌落是否為LGG，可從菌落中挑取一些純菌種，進行顯微鏡觀察和乳糖發酵實驗（MRSL肉湯）。做乳糖發酵實驗時，將挑取的純菌種接種到肉湯培養基後，有氧培養（37±1℃，1-2天）。由於LGG不發酵乳糖，故肉湯應是紫色的（未變色）。而若是能夠利用乳糖的微生物，則肉湯變為黃色。實驗時，利用純LGG菌種和任一能夠利用乳糖的其它菌種進行對照實驗。
7結果 以每克樣品中LGG的菌落數表示，即cfu/g。
8注意事項：
1）、製備培養基，滅菌前可將萬古黴素加到MRS-A培養基中混均，按照培養基標簽上使用說明進行滅菌；
2）、檢樣前需將樣品在室溫下放置1-2小時，使其溫度與室溫相同，稱取樣品時應將包含LGG益生菌的部分接入稀釋液中，混勻進行接種；
3）、根據樣品特性，接種稀釋倍數可選擇10-4和10-5，每個稀釋度分別接種兩個平皿；
4）、樣品製備完畢，將各樣液接種到培養皿，傾倒溫度為44-47℃培養基，整個操作過程必須在15分鍾內完成，同時做瓊脂空白試驗；
5）、待瓊脂凝固後，翻轉平皿放入厭氧罐，再放入厭氧測試條，然後放入產氣袋，產氣袋放入後應立即將蓋蓋嚴，避免產氣袋在空氣中暴露時間過長；
6）、檢樣放入厭氧罐後在規定的培養條件下進行培養，並隨時觀察厭氧測試條顏色變化情況（無氧為白色，有氧時為粉色），保證培養條件完全達到無氧狀態；放入測試條時注意不要靠壁，使其處於自然狀態。（一般在放入培養箱後3-5小時後觀察，如測試條顏色發生變化，應再放入產氣袋重新進行測試）。
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