理化指標
理化指標通常由生產廠商通過對原材料、生產工藝、生產過程進行質控,使用者通常用感官檢查或pH測定進行確認。
理化指標包括培養基的色澤,培養基的水分含量,培養基的澄清度,培養基的PH,固體培養基的凝膠程度。
微生物學指標
培養基對目標菌的促生長能力(生長率),培養基對非目標菌的抑製能力(選擇性),培養基的指示能力(生化特性)。
微生物學評估方法-
使用一套合適的質控菌株進行測試
定量法—培養基生產廠家或對培養基質量有特殊要求的實驗室對培養基質控 ;
半定量法—實驗室對培養基的質控;
定性法—實驗室對培養基的質控。
固體培養基的生長率測試-定量法
選擇合適稀釋度的質控菌懸液(目標菌)0.1mL,均勻塗布接種於待測平板和參比平板。每一稀釋度接種兩個平板。並按標準規定的培養條件培養平板。
計算生長率PR :
PR = NS/N0
PR:生長率。
NS:待測培養基平板上得到的菌落總數。
N0:參比培養基平板上獲得的菌落總數(該菌落總數應≥100CFU) 。
質控菌株的要求
具典型反應特性的生長良好的陽性菌株 ;
弱陽性菌株(對培養基中選擇劑等試劑敏感性強的菌株);
不具有該特性的陰性菌株;
部分或完全受抑製的菌株;
固體培養基的生長率測試半定量法
將質控菌株接種到非選擇性肉湯培養過夜。
用1ul接種環按圖劃線接種:
計算生長指數G:
每條有比較稠密菌落生長的劃線則G為1,每個培養皿上G最大為16。
如果僅一半的線有菌落生長,則G為0.5。
如果劃線上沒有菌落生長或生長量少於劃線的一半,則G為0。
記錄每個平板的得分總和便得到G。
固體培養基的生長率測試-定性法
將質控菌株接種到非選擇性肉湯培養過夜。
用1ul接種環取測試菌培養物在測試培養基表麵劃平行直線(細菌),或用接種針直接挑取斜麵培養物點種接種(黴菌)。並按標準規定的培養條件培養平板。
培養後按以下方法對培養基計分:
0 表示無生長;
1 表示微弱生長;
2 表示生長良好。
固體培養基生長率評價標準
非選擇性固體培養基和固體計數培養基PR值應不小於0.7;G值應大於6。
選擇性固體培養基PR值一般應不小於0.5,最低應為0.1 。
選擇性計數固體培養基上目標菌的生長率一般不小於0.7 。
定性法目標菌得分應為2。
固體培養基選擇性測試-半定量法
將質控菌株接種到非選擇性肉湯培養過夜。
用1μl接種環取選擇性測試工作菌懸液1環,在待測培養基表麵劃六條平行直線(如圖),同時接種兩個平板,劃線時可在培養基下麵放一個模板圖,按標準規定的培養條件培養平板。
固體培養基選擇性測試-半定量法
計算G:
每條有比較稠密菌落生長的劃線則G為1,每個培養皿上最多為6分。
如果僅一半的線有菌落生長,則G為0.5。
如果劃線上沒有菌落生長或生長量少於劃線的一半,則G為0。
評價標準:
G應小於6。
固體培養基生化特性測試-定性法
分別觀察質控菌株(包括目標菌和非目標菌)在培養基上形態、顏色及生化特征。
評價培養基的指示係統是否正常。
液體培養基測試-半定量法
混合菌接種:在待測液體培養基中接種10~100CFU目標菌,同時接種1000~5000CFU非目標菌,按標準規定條件培養。
非目標菌接種:在待測液體培養基中分別接種上述非目標菌,按標準規定條件培養。
用10μL接種環取1環混合菌接種培養物,劃線接種於特定的選擇性平板上,按標準規定條件培養。
吸取非目標菌接種培養物10μL,以塗布法或傾注法接種於非選擇性平板上(如TSA),按標準規定條件培養。
評價標準
目標菌在選擇性平板上的菌落應>10CFU,則生長率良好。
非目標菌在非選擇性平板上菌落數應<100CFU,則表示待測培養基選擇性良好。
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