冷凍真空幹燥保藏法又稱冷凍幹燥保藏法，簡稱凍幹法。它通常是用保護劑製備擬保藏菌種的細胞懸液或孢子懸液於安瓿（ānbù ）管中，再在低溫下快速將含菌樣凍結，並減壓抽真空，使水升華將樣品脫水幹燥，形成完全幹燥的固體菌塊。並在真空條件下立即融封，造成無氧真空環境，最後置於低溫下，使微生物處於休眠狀態，而得以長期保藏。常用的保護劑有脫脂牛奶、血清、澱粉、葡聚糖等高分子物質。
由於此法同時具備低溫、幹燥、缺氧的菌種保藏條件，因此保藏期長，一般達5～15年，存活率高，變異率低，是目前被廣泛采用的一種較理想的保藏方法。
恢複培養冷凍幹燥菌種的方法
一、安瓶管開封
1．用浸過75％酒精的脫脂棉擦淨安瓿管。
2．用火焰將安瓿管頂端適度加熱。
3．滴無菌水至加熱的安瓿管頂端使玻璃開裂。
4．用挫刀或鑷子敲下已開裂的安瓿管的頂端。
二、菌株恢複培養
1．用無菌吸管，吸取0.3～0.5ml適宜的液體培養基，滴人安瓿管內，輕輕振蕩，使凍於菌體溶解呈懸浮狀。
2．取0.1～0.2ml菌體懸浮液，移植於適宜的瓊脂斜麵／平板培養基上，剩餘的菌液，注入適宜的液體培養基內，然後在建議的溫度下培養。
3．若未能活化，或活化後有疑問時，請於收到菌種1個月內，通知營養與食品安全所，聯係補寄事宜。
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