PFGE的作用
PFGE是目前分子生物學技術在準確性，特異性，分辨率，重複性最好的方法之一。
染色體DNA經過特異性限製性內切酶的酶切作用，可以產生多條10-800kb的酶切片段，通過片斷的多少和大小來比較細菌的同源性。
根據同源性來推斷傳染來源和途徑；為更好的作好傳染病的防治起到一定的作用。
PFGE方法步驟
一、膠塊的製備
1、刮取適量新培養的細菌均勻渾濁於含有1ml細胞懸濁液的eppendorf中，調整OD值至4.0。
2、取400 μl CSB於eppendorf管中置37度水浴中孵育5分鍾。
3、在水浴管中加於20 μl蛋白酶K（20mg/ml）使其終濃度為0，5mg/ml。
4、在eppendorf管中加入400 μl的1%Seakem Gold（1%SDS），用槍頭輕輕混勻。將混合物加入模具，避免產生氣泡，室溫下凝固10-15分鍾。
二、細胞的裂解
1、每管中加入5ml蛋白酶K/CLB混合液。
2、將以製好的膠塊加入管中，使其在液麵下，將管子放在54 ℃水浴搖床中孵育2小時，轉速約170轉/分鍾。
三、洗膠塊
1、從水浴搖床中取出管子，倒掉CLB，每管加入15ml預熱的純水，放回50 ℃水浴搖床中，搖15分鍾。
2、倒掉水，用純水再洗一次。
3、倒掉水，加入15ml預熱的TE，放回50 ℃水浴搖床中，搖15分鍾。
4、倒掉TE，用TE重複洗4次，每次15分鍾。
5、倒掉TE ，加入10mlTE，放在4 ℃冰箱保存備用。
四、酶切
1、小心取出TE中的膠塊放幹淨的培養皿上。用刀片切2mm寬的膠塊放入含200μl稀釋液的eppendorf管中。放37 ℃水浴中孵育10-15分鍾。
2、槍頭吸出稀釋液，避免損傷膠塊。加入200μl酶切液，並確保膠塊在液麵下。放37 ℃水浴中孵育至少2小時。
五、加樣
1、製膠。
2、 從37 ℃水浴中取出管子，平衡到室溫。吸出酶切液，加入200μl0.5 ☓TBE平衡。
3、用小鏟將膠塊加入加樣孔中。並用溶化的膠封閉加樣孔。
六、電泳
1、電泳槽中加入2.2L 0.5 ☓TBE，蓋好蓋子。
2、打開主機和泵的開關。
3、打開冷凝機，確保溫度在14℃。
4、把膠放入電泳槽，設置電泳參數。
5、關機。
七、分析結果
讀膠，獲取圖像。
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